專利名稱：：無特定病原中國對蝦零換水苗種生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于對蝦苗種生產(chǎn)技術(shù)，是在培育無特定病原健康苗種中實現(xiàn)零換水的一種技術(shù)方法。背景纟支術(shù)目前，在對蟲下苗種培育中，隨著各發(fā)育階段對理化環(huán)境及斜料要求的不同，主要釆用適時滿足各發(fā)育階段的理化環(huán)境及何料需要，使幼體順利變態(tài)發(fā)育。中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所王清印起草的'中國對蝦養(yǎng)殖技術(shù)規(guī)范蟲下苗培育，(NY/T5059-2001),主要是利用不同辨料滿足幼體各階段發(fā)育需要；但是在幼體培育過程中，不同斜料對水質(zhì)有一定的影響，尤其是配合飼料的使用。因此，為了保持良好的水質(zhì)，以滿足其理化環(huán)境的要求，必須進行換水?？墒牵瑩Q水又易導(dǎo)致由進水而造成的污染，同時又把病害帶入到對蟲下苗種生產(chǎn)過程中；為了建立無特定病原(SPF)對蝦種群的選育及應(yīng)用(《漁業(yè)現(xiàn)代化》2006年第6期，17-20)研究中，建立了特定病原檢疫技術(shù)，在養(yǎng)成和孵化前定時進行嚴格的病原測試，用以監(jiān)測對蝦養(yǎng)成和成熟過程中的SPF狀態(tài)。該項研究其工作量非常大，因為在換水過程中，幾乎要定時對每個隔離家系進行檢測，另外，由于常規(guī)換水更易造成水質(zhì)污染，感染某種病原，即使立即進行隔離和處理，也增加了成本，減少了出苗量。如果再檢測不及時或檢測不當(dāng)，并導(dǎo)致病害相互傳染，也就難以保證把病害排除在對壞苗種生產(chǎn)過程之外。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是根據(jù)幼體發(fā)育的需要對育苗桶內(nèi)水體進行人工控溫、調(diào)光和充氣，并可根據(jù)發(fā)育階段階段對何料要求，采用合適和適量的動、植物斜料和優(yōu)質(zhì)伺料，同時通過對各家系隔離、調(diào)整各家系放養(yǎng)密度、利用特定病原檢疫技術(shù)進行病原檢測等措施，實現(xiàn)對蝦苗種生產(chǎn)過程中的零換水，排除常規(guī)的水交換已導(dǎo)致由進水而造成的污染，同時也把病害排除在對奸苗種生產(chǎn)過程之外。一方面實現(xiàn)大規(guī)模苗種生產(chǎn)，另一方面可以向?qū)ξr養(yǎng)殖企業(yè)提供SPF親蝦和SPF苗種。本發(fā)明所采用的技術(shù)方法是1、前期的準備；2、生物餌料的培養(yǎng)；3、苗種的培育。1、前期的準備，包括1)、培育苗種海水消毒劑處理；2)、苗種培育池的消毒；1)、培育苗種海水消毒劑處理培育苗種海水經(jīng)沙濾、過濾袋(80目)二次過濾，用有效氯達O.2-0.3x10—6的含氯消毒劑處理，經(jīng)曝氣水中余氯消失后方可使用；2)、苗種培育池的消毒將苗種培育池用濃度為200ppm漂白粉洗刷內(nèi)壁，用消毒海水沖洗干凈后曬干待用；2、生物飾料的培養(yǎng)，包括1)、何料池的消毒；2)、培養(yǎng)生物餌料海水的消毒；3)、小球藻培養(yǎng)液的配制；4)、金藻培養(yǎng)液的配制；5)、輪蟲培養(yǎng)；6)、卣蟲脫殼孵化；1)、飾料池的消毒將辨料池的四壁和底部用鐵刷洗刷干凈，用沙濾海水沖洗，再用水稀釋的次氯酸鈉(NaC10:H20=1:500左右)對四壁和底部進行消毒，然后用沙濾海水沖洗干凈；2)、培養(yǎng)生物何料海水的消毒在每個何料池中，將經(jīng)過沉淀和沙濾的海水用500目的篩絹網(wǎng)過濾，每立方過濾海水中加入300ml次氯酸鈉溶液(有效氯含量8-12°/。，以下同)，攪拌混勻；充氣68小時后，再在其中加入^i代^L酸鈉30克，以中和余氯；3)、小球藻培養(yǎng)液的配制在上述消毒的每立方海水中依次加入溶解的尿素60克、溶解的磷酸二氫鉀(KH2P03)5克、濃度10。/。的檸檬酸鐵溶液lml，攪拌混勻；4)、金藻培養(yǎng)液的配制在每立方消毒海水中依次加入溶解的NaNO360g、溶解的KH2P044g、濃度10%的檸檬酸鐵溶液50ml、溶解的維生素Bl100毫克、溶解的維生素B120.5毫克；5)、輪蟲培養(yǎng)在溫度25°C、鹽度27~28%。、小球藻培養(yǎng)密度達到1000~1500萬/ml的消毒海水池中，接輪蟲50個/ml，第二天開始投喂面包酵母，每億輪蟲分4~6次投喂融化鮮酵母200g;6)、卣蟲脫殼孵化閨蟲卵放入鹽度27~28%。海水中，每升海水加100克左右的面蟲卵浸泡3~4小時；首先上述浸泡囟蟲卵的每升海水加入13克固態(tài)Na0H;然后在其中加入500ml次氯酸鈉溶液；迅速置于流水中冷卻，不斷搖動混勻；20分鐘后，混合物變?yōu)榧t色或粉紅色，將混合物倒入消毒海水中；IOO目濾袋濾出卵；用消毒海水洗滌3遍即可孵化；孵化16小時后(將化液表面的光照在2000勒)孵化出，用消毒海水洗滌3遍即可投喂；卣蟲孵化溫度2830。C;3、苗種的培育包括1)、親奸的人工培育；2)、集卵；3)、幼體選優(yōu)及消毒；4)、病原檢測；5)、第一次幼體培育密度調(diào)整；6)、第二次幼體培育密度調(diào)整；7)、對蝦出苗；1)、親蝦的人工培育親蝦入池前用福爾馬林消毒，培養(yǎng)用水用沙濾水并經(jīng)有效氯含量達0.2-0.3xl(T的含氯消毒劑處理，選擇個體較大(體長15cm以上)、健壯(身體飽滿、彈跳力強)、無外傷、納精嚢潔白飽滿的人工培育成熟親蝦，按照性腺發(fā)育情況的好差，分別飼養(yǎng)；其中，對性腺發(fā)育差(性腺為黃色在背部呈細條狀)的雌蝦采用摘除眼柄的方法促熟，性腺發(fā)育好(性腺擴展到背部兩邊，有較大側(cè)葉)的雌壞進行精莢移植，3-4天后放入室內(nèi)的育苗池中；已交尾親蝦性腺發(fā)育到第四期，直接放到育苗池中；親蝦性腺發(fā)育到第四期，即產(chǎn)卯開始前，每個育苗池中加入2ppmEDTA(乙二胺四乙酸)，連續(xù)充氣，水溫為15°C，投喂經(jīng)檢測不攜帶特定病原體的鮮活沙蠶，投喂量為對蝦總體重的10%;用遮光簾遮光；2)、集卵親蝦產(chǎn)卵后，將親蝦撈出，用有效氯含量達O.2-0.3x10—6的含氯消毒劑處理過且不含余氯的沙濾水充分清洗壞卵，并不斷沖洗去除糞便、殘飾等污物，并每隔2h用攪卵器攪卵一次，充氣量調(diào)到氣流剛好達到水表面即可；36小時后，卵孵化成無節(jié)幼體；3)、幼體選優(yōu)及消毒孵化結(jié)束后，停止充氣，待死卵和污物全部沉于池底后，用虹吸法吸取表層無節(jié)幼體；再用有效碘濃度為5x1(TPVP碘消毒處理30秒，在經(jīng)消毒海水清洗l-2分鐘后移入育苗池內(nèi)培育；4)、病原;險測利用核酸探針法和PCR法進行病原體的檢測，對孵化為無節(jié)幼體的各家系取樣進行病原檢測，結(jié)果為陰性的家系繼續(xù)培育，檢測為陽性的家系棄之；在親奸和幼體培育過程中使用的鮮活斜料，如沙蠶、輪蟲、卣蟲等均需抽樣纟企測；5)、第一次幼體培育密度調(diào)整受精卵孵化成無節(jié)幼體后記為第一天，進行第一次幼體培育密度調(diào)整，每個家系幼體以每立方水20萬尾密度放入育苗池中，溫度每天升高2。C，最后穩(wěn)定至24。C;第一次幼體培育密度調(diào)整后，投O.3卯m利福平，以抑制細菌的繁殖，保持良好的水質(zhì)；第一次幼體培育密度調(diào)整程序充氣至整育苗池成沸騰狀把整池的無節(jié)幼體打勻，用200L的燒杯從中間和邊上各取三杯，計取杯中數(shù)量，計算無節(jié)幼體密度后，利用外推法求出幼體總數(shù)，然后用吸管吸出所需的量，使其達到每立方水20萬尾幼體的密度；在苗種培育的第6天，即由無節(jié)幼體變成蚤狀幼體，投喂金藻(濃度保持在l萬個細胞/ml)，到第10天后停止投喂；第7天(幼體完全變?yōu)樵闋钣左w)投喂輪蟲，保持在3個/ml，到第12天(即變成糠蝦幼體)后停止投喂；第8天(即蚤狀幼體第三天)，投喂O號顆粒飾料(用100目的網(wǎng)過濾)，投喂量為每萬尾幼體O.lg/次(每天投喂4次)；水溫保持在24。C;在苗種培育的第ll天，投喂卣蟲，保持3ml—個卣蟲幼體；第12天改投l號顆粒何料(用80目的網(wǎng)過濾)，投喂量為每萬尾幼體O.15g/次(每天投喂4次)；水溫保持在24。C;6)、第二次幼體培育密度調(diào)整在苗種培育的第16天，進行第二次幼體培育密度調(diào)整，即把原先育苗池中的幼體進行分池，以每立方水10萬尾的密度》丈入育苗池，并繼續(xù)投l號顆粒斜料(用80目的網(wǎng)過濾)，投喂量為每萬尾幼體O.66g/次(每天4次)，投喂卣蟲，保持3ml—個；水溫保持在24。C;第二次幼體培育密度調(diào)整程序充氣至整池成沸騰狀把整池的幼體打勻，用"OL的燒杯從中間和邊上各取三杯，計取杯中數(shù)量，計算幼體密度后，利用外推法求出幼體總數(shù)，然后用吸管吸出所需的量，使其達到每立方水10萬尾幼體的密度；7)、出苗在苗種培育的第25天蝦出苗，每天水溫下降低于rc情況下，逐步降至室溫出苗。本發(fā)明的特點是1、實現(xiàn)了在整個對奸苗種培育過程中不用換水，從而避免進水而造成的污染，切斷由換水造成的病害在各家系間相互傳染，并能培育出滿足生產(chǎn)需要的苗種；2、根據(jù)幼體發(fā)育的需要，可通過人工控制滿足幼體各發(fā)育階段對理化環(huán)境及辨料種類和用量的需要；3、利用建立的特定病原檢疫技術(shù)，只需在孵化后進行一次病原檢測即可，既節(jié)約了成本，也增加了出苗量。具體實施例方式下面通過實例對本發(fā)明技術(shù)進行詳細香又述為了排除常規(guī)的水交換已導(dǎo)致由進水而造成的污染，本發(fā)明提供了一種零換水健康苗種生產(chǎn)技術(shù)，本技術(shù)不僅能滿足幼體各發(fā)育階段對理化環(huán)境及何料要求，同時也把病害排除在對奸苗種生產(chǎn)過程之外，培育出無特定病原中國對奸健康苗種。本實驗是在青島市國家海洋研究中心即墨市鰲山衛(wèi)引種育種中心進行的，本發(fā)明其技術(shù)方法包括1、實驗前期的準備；2、生物鉺料的培養(yǎng)；3、苗種的培育。1、實驗前期的準備，主要包括培育苗種海水消毒劑處理、苗種培育桶等器具的消毒。苗種培育方式為室內(nèi)200L育苗桶育苗，首先用濃度為200ppm漂白粉洗刷育苗桶內(nèi)壁，用消毒海水沖洗，干凈后曬干待用。消毒海水是用沙濾水并經(jīng)有效氯含量達O.3x10—6的含氯消毒劑處理，經(jīng)曝光水中余氯消失后使用。所有所用的器具要用水稀釋的NaClO(NaC10:H20=1:500)進行消毒，然后用消毒海水沖洗，干凈后曬干待用。所用器具經(jīng)過有效氯的消毒處理，曬干后，將不攜帶任何的病原，因為次氯酸鈉主要是通過它的水解形成次氯酸，次氯酸再進一步分解形成新生態(tài)氧[O],新生態(tài)氧的極強氧化性使菌體和病毒的蛋白質(zhì)變性，從而使病原微生物致死。2、生物斜料的培養(yǎng)，包括1)、斜料池的消毒；2)、培養(yǎng)生物何料海水的消毒；3)、小球藻培養(yǎng)液的配制；4)、金藻培養(yǎng)液的配制；5)、輪蟲培養(yǎng)；6)、卣蟲脫殼孵化。1)、斜料池的消毒用鐵刷將斜料池的四壁和底部刷干凈，再用沙濾海水沖洗干凈。用水稀釋的次氯酸鈉(NaC10:H20=1:500左右)對四壁和底部進行消毒，然后用沙濾海水沖洗干凈。這樣以來飾料池內(nèi)的病原樣吏生物也將被殺死。2)、培養(yǎng)生物何料海水的消毒在每個飾料池中，將3m'經(jīng)過沉淀和沙濾的海水用500目的篩絹網(wǎng)過濾，加入900ml次氯酸鈉溶液(有效氯含量12°/。，以下同)，攪拌混勻。充氣6~8小時后，再在其中加入硫代硫酸鈉90克，以中和余氯。如果不中和余氯將因為氯的含量過高，直接殺死接種到其中的生物餌料，并影響幼體的發(fā)育。3)、小球藻培養(yǎng)液的配制在31113上述消毒的海水中依次加入溶解的尿素180克、溶解的磷酸二氬鉀(KH2P03)15克、濃度10%的檸檬酸鐵溶液30ml,攪拌混勻。這里加入的尿素、磷酸二氬鉀是用蒸餾水溶解后，直接均勻潑到3m"肖毒的海水中。而檸檬酸鐵是預(yù)先用電爐把水煮沸然后加入檸檬酸鐵配成濃度10%的檸檬酸鐵溶液。配制小球藻培養(yǎng)液，其尿素中的N、磷酸二氬鉀中的P、檸檬酸鐵中的Fe都是小球藻生長所需的營養(yǎng)。4)、金藻培養(yǎng)液的配制在lm^消毒海水中依次加入溶解的硝酸鈉(NaN03)60g、溶解的磷酸二氫鉀(KH2P04)4g、濃度10。/。的檸檬酸鐵溶液50ml、100毫克溶解的維生素Bl、0.5毫克溶解的維生素B12。NaN03、KH2P04、維生素Bl和B12也是用蒸餾水溶解后，直接均勻潑到lm"肖毒的海水中；配制的金藻培養(yǎng)液，其硝酸鈉中的N、磷酸二氫鉀中的P、檸檬酸鐵中的Fe以及維生素Bl和B12都是金藻生長所需的營養(yǎng)。5)、輪蟲培養(yǎng)在溫度25。C、鹽度28%。、小球藻培養(yǎng)密度達到1500萬/ml的消毒海水池中，接輪蟲50個/ml,第二天開始投喂面包酵母，l億輪蟲分6次投喂鮮酵母200g(投喂前先在少量水中將水凍的酵母塊融化，充分攪拌成酵母懸液，然后施入培養(yǎng)輪蟲的水體)。小球藻主要作為輪蟲的飾料，加入酵母主要是滿足輪蟲繁殖的營養(yǎng)需要。6)、卣蟲脫殼孵化在20L塑料袋中，200克卣蟲加到2000ml鹽度為28%。海水中浸泡4小時；首先加入固態(tài)NaOH26克；然后加入1000ml次氯酸鈉溶液；迅速置于流水中冷卻，不斷搖動混勻；20分鐘后，混合物變?yōu)榧t色或粉紅色，將混合物倒入水中；IOO目濾袋濾出卵；用消毒海水洗滌3遍即可孵化。孵化16小時(孵化液表面的光照在2000勒)后將化出，用消毒海水洗滌3遍即可投喂。卣蟲將化溫度3(TC。3、苗種的培育，包括1)、親蝦的人工培育；2)、集卵；3)、幼體選優(yōu)及消毒；4)、病原檢測；5)、第一次幼體培育密度調(diào)整；6)、第二次幼體培育密度調(diào)整；7)、對蝦出苗。1)、親蚱的人工培育親蝦入池前用福爾馬林消毒，培養(yǎng)用水用沙濾水并經(jīng)有效氯含量達0.3xl(T'的含氯消毒劑處理。選擇個體較大(體長15cm以上)、健壯(身體飽滿、彈跳力強)、無外傷、納精嚢潔白飽滿的人工培育成熟親蟲下；雌蝦性腺發(fā)育過程中，根據(jù)發(fā)育情況的好差，分為差、好、較好、最好四種，其對應(yīng)發(fā)育四個時期性腺的外部特征黃色—褐色—黑褐色-墨黑色，黃色期時性腺在背部呈細條狀，褐色期性腺在背部條狀較粗，至黑褐色期性腺更粗，在靠近頭胸曱處向兩側(cè)擴展，出現(xiàn)側(cè)葉，墨黑色期卵巢寬大，性腺發(fā)育良好，擴展到背部兩邊，有較大側(cè)葉。按照性腺發(fā)育情況，分別伺養(yǎng)；其中，對性腺發(fā)育差的雌奸采用摘除眼柄的方法促熟；性腺發(fā)育好的雌蟲下進行精莢移植，4天后放入室內(nèi)的育苗桶(200L)中，水量為150L。已交尾親蝦性腺發(fā)育到第四期，直接放到育苗桶中。雌蝦性腺發(fā)育到第四期，即產(chǎn)卵開始前，每個桶中加入0.3gEDTA(乙二胺四乙酸)，加入EDTA主要目的是絡(luò)合海水中的重金屬離子，因為重金屬離子對受精卵的孵化有較大的影響。連續(xù)充氣，水溫為15°C，投喂經(jīng)檢測不攜帶特定病原體的鮮活沙蠶，投喂量為對奸總體重的10%。2)、集卵親蝦產(chǎn)卵后，將親奸撈出，用有效氯含量達O.3xl(T的含氯消毒劑處理過且不含余氯的沙濾水充分清洗蝦卵，并不斷沖洗去除糞便、殘倂等污物，并每隔2h用攪卵器攪卵一次，充氣量調(diào)到氣流剛好達到水表面即可。攪卵的目的是防止受精卵間互相積壓，便于受精卵的孵化。而如果充氣量太大將導(dǎo)致卵破裂。水溫15。C,36小時后，受精卵孵化成無節(jié)幼體。3)、幼體選優(yōu)及消毒孵化結(jié)束后，停止充氣，待死卵和污物全部沉于桶底后，用虹吸法吸取表層無節(jié)幼體。再用有效硪濃度為5x10—卞VP碘消毒處理30秒，在經(jīng)消毒海水清洗2分鐘后移入育苗桶內(nèi)培育。用遮光簾遮光，主要在無節(jié)幼體期光線不要太強，以便無節(jié)幼體均勻分布到育苗桶水體內(nèi)。因為無節(jié)幼體有趨光性，如果光線太強，它們將集群，不利于其生長和變態(tài)。4)、病原;險測利用核酸探針法和PCR法進行病原體的檢測，對孵化為無節(jié)幼體的各家系取樣進行病原檢測，結(jié)果為陰性的家系繼續(xù)培育，檢測為陽性的家系棄之。在親奸和幼體培育過程中使用的鮮活飾料，如沙蠶、輪蟲、卣蟲等均需抽樣檢測。進行病原的檢測是為了徹底去除帶病幼體，并切斷其他病源的傳播途徑。5)、第一次幼體培育密度調(diào)整受精卵孵化成無節(jié)幼體后記為第一天，進行第一次幼體培育密度調(diào)整，每個家系取3萬尾放入育苗桶中，溫度每天升高2。C,最后穩(wěn)定到24。C。第一次幼體培育密度調(diào)整后，每桶投o.03g利福平，以抑制細菌的繁殖，保持良好的水質(zhì)。第一次幼體培育密度調(diào)整程序充氣至整桶成沸騰狀把整桶的無節(jié)幼體打勻，用200L的燒杯從中間和邊上各取三杯，計取杯中數(shù)量，計算無節(jié)幼體密度后，利用外推法求出幼體總數(shù)，然后用吸管吸取3萬尾幼體轉(zhuǎn)移至另一育苗桶。培育密度調(diào)整是根據(jù)水體的大小調(diào)節(jié)幼體的數(shù)量，這樣即利于幼體的生長發(fā)育，又利于保持幼體生長發(fā)育的水質(zhì)環(huán)境。在苗種培育的第6天為1.l期(見附表l),即由無節(jié)幼體變成蚤狀幼體，投喂金藻(金藻在育苗桶中濃度保持在l萬個細胞/ml)，到第10天后停止投喂；第7天為1.2期(幼體完全變?yōu)樵闋钣左w)投喂輪蟲，保持在3個/ml，到第12天(即變成糠壞幼體)后停止投喂；第8天(即蚤狀幼體第三天1.3期)，投喂O號顆粒辨料(用100目的網(wǎng)過濾)，每桶投喂量為0.3g/次(每天4次)。水溫保持在24。C。各種斜料的投喂量是根據(jù)幼體的數(shù)量進行的調(diào)整，這樣的投喂量，整個育苗過程中，不需要換水。在苗種培育的第ll天(即1.6期)，投喂鹵蟲，保持3ml—個鹵蟲幼體；第12天(即1.7期)改投l號顆粒何料(用80目的網(wǎng)過濾)，每桶投喂量為0.45g/次(每天4次)(具體投喂是時間和投喂量詳見附表l)。水溫保持在24°C。6)、第二次幼體培育密度調(diào)整在苗種培育的第16天(即2.l期)，進行第二次幼體培育密度調(diào)整，即把原先桶中的幼體進行分桶，每桶放入l.5萬尾，并繼續(xù)投l號顆粒餅料(用80目的網(wǎng)過濾)，每桶投喂量為O.99g/次(每天4次)，投喂卣蟲，保持3ml一個；水溫保持在24。C。進行第二次幼體培育密度調(diào)整，也是根據(jù)幼體的變態(tài)后水體對幼體的容納量和何料需要量進行的調(diào)整，這樣的操作和投喂量，也保證了整個育苗過程中的零換水。第二次幼體培育密度調(diào)整程序充氣至整桶成沸騰狀把整桶的幼體打勻，用200L的燒杯從中間和邊上各取三杯，計取杯中數(shù)量，計算幼體密度后，利用外推法求出幼體總數(shù)，然后用吸管吸取l.5萬尾幼體轉(zhuǎn)移至另一育苗桶。7)、出苗在苗種培育的第25天(即3.0期)蟲下出苗，每天水溫下降低于rc情況下逐步降至室溫出苗。苗種經(jīng)檢測無特定病原率達100%,苗種規(guī)格為1.01.2cm,單位水體產(chǎn)量10萬尾。表1無特定病原中國對奸零換水苗種培育的技術(shù)操作規(guī)程<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>注a)、幼體識別E表示卵；N表示無節(jié)幼體；Z表示蚤狀幼體；M表示糠蝦；P代表仔蝦;b)、飾料投喂時間早5:00;10:00;下午4:00;晚10:00;c)、配合飼料為思福德(Seafood)生產(chǎn)的幼體配合詞料。總之，本技術(shù)生產(chǎn)全程均是在無特定病原情況下的生產(chǎn)工藝。本技術(shù)經(jīng)生產(chǎn)應(yīng)用，對奸苗種生產(chǎn)無特定病原率達100%，苗種規(guī)格為1.0~1.2cm,單位水體產(chǎn)量高達10萬尾，技術(shù)操作規(guī)程簡單，適合應(yīng)用于大規(guī)模苗種生產(chǎn)，并可以向?qū)轲B(yǎng)殖企業(yè)提供SPF親奸和SPF苗種。權(quán)利要求1、一種無特定病原中國對蝦零換水苗種生產(chǎn)方法，其特征在于它的方法，包括(1)、前期的準備；(2)、生物餌料的培養(yǎng)；(3)、苗種的培育；(1)、前期的準備，包括A、培育苗種海水消毒劑處理；B、苗種培育池的消毒；A、培育苗種海水消毒劑處理培育苗種海水經(jīng)沙濾和80目過濾袋二次過濾，用有效氯達0.2-0.3×10-6的含氯消毒劑處理，經(jīng)曝氣水中余氯消失后方可使用；B、苗種培育池的消毒將苗種培育池用濃度為200ppm漂白粉洗刷內(nèi)壁，用消毒海水沖洗干凈后曬干待用；(2)、生物餌料的培養(yǎng)，包括A、餌料池的消毒；B、培養(yǎng)生物餌料海水的消毒；C、小球藻培養(yǎng)液的配制；D、金藻培養(yǎng)液的配制；E、輪蟲培養(yǎng)；F、鹵蟲脫殼孵化；A、餌料池的消毒將餌料池的四壁和底部用鐵刷洗刷干凈，用沙濾海水沖洗，再以NaClO∶H2O＝1∶500稀釋的次氯酸鈉對四壁和底部進行消毒，然后用沙濾海水沖洗干凈；B、培養(yǎng)生物餌料海水的消毒在每個餌料池中，將經(jīng)過沉淀和沙濾的海水用500目的篩絹網(wǎng)過濾，每立方過濾海水中加入300ml有效氯含量8-12％的次氯酸鈉溶液，攪拌混勻；充氣6～8小時后，再在其中加入硫代硫酸鈉30克，以中和余氯；C、小球藻培養(yǎng)液的配制在上述消毒的每立方海水中依次加入溶解的尿素60克、溶解的磷酸二氫鉀5克、濃度10％的檸檬酸鐵溶液1ml，攪拌混勻；D、金藻培養(yǎng)液的配制在每立方消毒海水中依次加入溶解的NaNO360g、溶解的KH2PO44g、濃度10％的檸檬酸鐵溶液50ml、溶解的維生素B1100毫克、溶解的維生素B120.5毫克；E、輪蟲培養(yǎng)在溫度25℃、鹽度27～28‰、小球藻培養(yǎng)密度達到1000～1500萬/ml的消毒海水池中，接輪蟲50個/ml，第二天開始投喂面包酵母，每億輪蟲分4～6次投喂融化鮮酵母200g；F、鹵蟲脫殼孵化鹵蟲卵放入鹽度27～28‰海水中，每升海水加100克左右的鹵蟲卵浸泡3～4小時；首先上述浸泡鹵蟲卵的每升海水加入13克固態(tài)NaOH；然后在其中加入500ml有效氯含量8-12％的次氯酸鈉溶液；迅速置于流水中冷卻，不斷搖動混勻；20分鐘后，混合物變?yōu)榧t色或粉紅色，將混合物倒入消毒海水中；100目濾袋濾出卵；用消毒海水洗滌3遍即可孵化；孵化液表面的光照在2000勒，孵化16小時孵化出，用消毒海水洗滌3遍即可投喂；鹵蟲孵化溫度28～30℃；(3)、苗種的培育包括A、親蝦的人工培育；B、集卵；C、幼體選優(yōu)及消毒；D、病原檢測；E、第一次幼體培育密度調(diào)整；F、第二次幼體培育密度調(diào)整；G、對蝦出苗；A、親蝦的人工培育親蝦入池前用福爾馬林消毒，培養(yǎng)用水用沙濾水并經(jīng)有效氯含量達0.2-0.3×10-6的含氯消毒劑處理，體長15cm以上、身體飽滿、彈跳力強、無外傷、納精囊潔白飽滿的人工培育成熟親蝦，按照性腺發(fā)育情況的好差，分別飼養(yǎng)；其中，對性腺發(fā)育差即性腺為黃色在背部呈細條狀的雌蝦采用摘除眼柄的方法促熟，性腺發(fā)育好即性腺擴展到背部兩邊，有較大側(cè)葉的雌蝦進行精莢移植，3-4天后放入室內(nèi)的育苗池中；已交尾親蝦性腺發(fā)育到第四期，直接放到育苗池中；親蝦性腺發(fā)育到第四期，即產(chǎn)卵開始前，每個育苗池中加入2ppm乙二胺四乙酸，連續(xù)充氣，水溫為15℃，投喂經(jīng)檢測不攜帶特定病原體的鮮活沙蠶，投喂量為對蝦總體重的10％；用遮光簾遮光；B、集卵親蝦產(chǎn)卵后，將親蝦撈出，用有效氯含量達0.2-0.3×10-5的含氯消毒劑處理過且不含余氯的沙濾水充分清洗蝦卵，并不斷沖洗去除糞便、殘餌等污物，并每隔2h用攪卵器攪卵一次，充氣量調(diào)到氣流剛好達到水表面即可；36小時后，卵孵化成無節(jié)幼體；C、幼體選優(yōu)及消毒孵化結(jié)束后，停止充氣，待死卵和污物全部沉于池底后，用虹吸法吸取表層無節(jié)幼體；再用有效碘濃度為5×10-6PVP碘消毒處理30秒，在經(jīng)消毒海水清洗1-2分鐘后移入育苗池內(nèi)培育；D、病原檢測利用核酸探針法和PCR法進行病原體的檢測，對孵化為無節(jié)幼體的各家系取樣進行病原檢測，結(jié)果為陰性的家系繼續(xù)培育，檢測為陽性的家系棄之；在親蝦和幼體培育過程中使用的鮮活餌料，如沙蠶、輪蟲、鹵蟲等均需抽樣檢測；E、第一次幼體培育密度調(diào)整受精卵孵化成無節(jié)幼體后記為第一天，進行第一次幼體培育密度調(diào)整，每個家系幼體以每立方水20萬尾密度放入育苗池中，溫度每天升高2℃，最后穩(wěn)定至24℃；第一次幼體培育密度調(diào)整后，投0.3ppm利福平，以抑制細菌的繁殖，保持良好的水質(zhì)；第一次幼體培育密度調(diào)整程序充氣至整育苗池成沸騰狀把整池的無節(jié)幼體打勻，用200L的燒杯從中間和邊上各取三杯，計取杯中數(shù)量，計算無節(jié)幼體密度后，利用外推法求出幼體總數(shù)，然后用吸管吸出所需的量，使其達到每立方水20萬尾幼體的密度；在苗種培育的第6天，即由無節(jié)幼體變成蚤狀幼體，投喂金藻，濃度保持在1萬個細胞/ml，到第10天后停止投喂；第7天幼體完全變?yōu)樵闋钣左w，投喂輪蟲，保持在3個/ml，到第12天即變成糠蝦幼體后停止投喂；第8天即蚤狀幼體第三天，投喂0號顆粒餌料，用100目的網(wǎng)過濾，投喂量為每萬尾幼體0.1g/次，每天投喂4次；水溫保持在24℃；在苗種培育的第11天，投喂鹵蟲，保持3ml一個鹵蟲幼體；第12天改投1號顆粒餌料，用80目的網(wǎng)過濾，投喂量為每萬尾幼體0.15g/次，每天投喂4次；水溫保持在24℃；F、第二次幼體培育密度調(diào)整在苗種培育的第16天，進行第二次幼體培育密度調(diào)整，即把原先育苗池中的幼體進行分池，以每立方水10萬尾的密度放入育苗池，并繼續(xù)投1號顆粒餌料，用80目的網(wǎng)過濾，投喂量為每萬尾幼體0.66g/次，每天4次，投喂鹵蟲，保持3ml一個；水溫保持在24℃；第二次幼體培育密度調(diào)整程序充氣至整池成沸騰狀把整池的幼體打勻，用200L的燒杯從中間和邊上各取三杯，計取杯中數(shù)量，計算幼體密度后，利用外推法求出幼體總數(shù)，然后用吸管吸出所需的量，使其達到每立方水10萬尾幼體的密度；G、出苗在苗種培育的第25天蝦出苗，在每天水溫下降低于1℃情況下，逐步降至室溫出苗。全文摘要一種無特定病原中國對蝦零換水苗種生產(chǎn)方法，其操作程序是首先首先是前期的準備，主要包括培育苗種海水消毒劑處理、苗種培育桶等器具的消毒和生物餌料的培養(yǎng)；其次進行親蝦的人工培育、集卵和幼體選優(yōu)及消毒；同時用特定病原檢疫技術(shù)對使用的鮮活餌料和集取的無節(jié)幼體進行嚴格的病原測試，結(jié)果陰性者繼續(xù)培育；然后調(diào)整各家系放養(yǎng)密度，人工控制環(huán)境條件，并根據(jù)發(fā)育階段階段對理化環(huán)境及餌料要求，采用合適和適量的動、植物餌料和優(yōu)質(zhì)飼料。本技術(shù)操作規(guī)程簡單，適合應(yīng)用于大規(guī)模苗種生產(chǎn)，對蝦苗種生產(chǎn)無特定病原率達100％，向?qū)ξr養(yǎng)殖企業(yè)提供SPF親蝦和SPF苗種或高健康苗種。文檔編號A01K61/00GK101185426SQ20071011501公開日2008年5月28日申請日期2007年11月20日優(yōu)先權(quán)日2007年11月20日發(fā)明者杰孔,張?zhí)鞎r,生欒,坤羅申請人:中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所