專利名稱：同源異源多倍體水稻的選育的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及同源異源多倍體水稻的選育，屬于多倍體水稻育種的技術領域。
背景技術：
目前世界上水稻育種包括常規(guī)育種、雜交育種和分子育種全部是建立在二倍體水平基礎上的，受有性生殖限制不能廣泛利用20多種野生稻中的有利基因，難以達到增產50％以上的目標，然而，多倍體化是自然界植物進化的重要方式，高等植物70％左右是多倍體，主要糧棉油作物如小麥、棉花、油菜等也是多倍體，它們經歷了二倍體向多倍體進化的過程，并且伴隨著產量的成倍增長。因此蔡得田、袁隆平、盧興桂在中國專利ZL00114471.5中提出利用遠緣雜交和多倍體雙重優(yōu)勢選育超級稻的選育技術，它包括三個階段，即亞種間、種間和基因組間雜種優(yōu)勢利用。但是自從1933年日本學者Nakamori發(fā)現(xiàn)同源四倍體水稻(Nakamori，E.On the occurrence of the tetraploid plant of rice Oryzasativa L.Proc.Imp.Acad.9，340-341，1993)以來，世界上有許多科學家從事水稻多倍體研究，但進展緩慢。其主要原因是同源多倍體水稻結實率低，一般都低于50％，達不到應用于生產的水平。因此日本學者Nagai認為，對于水稻育種家來說，多倍體育種是很少有希望的(Nagai I.Japonica rice.TokyoYokendoLtd，1962)。經分析多倍體水稻結實率低的原因主要在于親緣關系太近，缺乏減數(shù)分裂穩(wěn)定性，因此選育出多倍體減數(shù)分裂穩(wěn)定性(PMeS)品系(Cai DT etal，Breeding of polyploidy rice pines with polyploidy meiosis stability，Chinese Science.C series Life Sciense，2007.11-9)解決了秈粳亞種間多倍體雜種的低結實率問題，并且構建了能夠結實、營養(yǎng)生長優(yōu)勢強的異源四倍體水稻(AABB和AAEE)雜種，但存在易落粒、結實率達不到70％以上、籽粒比秈粳四倍體雜種小，僅與栽培稻二倍體相當。為此需要充分利用PMeS品系(ApAp基因組)的高結實特性，不易落粒性和A基因組同源四倍體的籽粒增大性，以異源四倍體AABB為親本與PMeS品系雜交創(chuàng)建同源異源多倍體水稻，以選育出雜種優(yōu)勢強、結實率高、不易落粒、籽粒大、抗逆性強的新型多倍體水稻而應用于生產，大幅度提高水稻產量，有利于解決世界糧食供應不足的危機。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是創(chuàng)建同源異源多倍體水稻以便充分利用野生稻資源中存在著的許多有利基因和栽培稻PMeS品系的減數(shù)分裂穩(wěn)定性、高結實性和不易落粒性從而利用遠緣雜交和多倍體化雙重優(yōu)勢，應用于新型多倍體水稻育種。
本發(fā)明的技術方案為a.選擇親本，b.雜交與激素處理，c.胚挽救培養(yǎng)，d.染色體加倍，e.加倍愈傷組織分化出苗或加倍叢芽生長出苗，f.生根培養(yǎng)，g.移栽培育，h.加倍植株水稻的鑒定。
本發(fā)明的具體過程為a.選擇親本選擇優(yōu)良亞洲栽培稻(AA基因組)品種二倍體與斑點野生稻(Oryza sativaL，BB基因組)二倍體雜交加倍培育或栽培稻四倍體與斑點野生稻四倍體雜交的異源四倍體AABB為親本，以具有多倍體減數(shù)分裂穩(wěn)定性(PMeS，PolyploidMeiosis Stability)品系HN2026、Sg99012及其衍生系的二倍體和四倍體為另一親本。
b.雜交與激素處理雜交以異源四倍體AABB為母本，以PMeS品系為父本，采用剪穎去雄，在授粉前1.5-2小時往柱頭上噴灑混合激素溶液(2，4-D0.02-0.05mg/L+GA30.03-0.06mg/L)，稍稍晾干。剪取開花剛開始的父本稻穗置于母本稻穗上方，輕輕抖動使花粉盡可能多的散落到柱頭上。授粉后的當天下午4時后往雜交穗時噴灑混合激素一次，第二天和第三天下午各噴灑一次，以促進受精后的雜交胚胎發(fā)育。
C.胚挽救培養(yǎng)取授粉后7-10天的幼嫩谷粒，剝去穎殼，經消毒處理后接種于胚挽救培養(yǎng)基種中，25℃暗培養(yǎng)。胚挽救培養(yǎng)基配方為N6+6-BA 0.3-0.7mg/L+NAA0.3-1.0mg/L+CH50-100mg/L+Sucrose3％-5％+Agar0.75％，pH6.0。
d.染色體加倍在胚挽救培養(yǎng)過程中，部分幼胚萌發(fā)生長出芽，另一部分則誘導出愈傷組織，因此通過愈傷組織和和叢芽二種途徑誘導染色體加倍。
d-1.愈傷組織加倍處理取生長旺盛，淺黃色具顆粒狀表面的愈傷組織接入含有秋水仙素(Colchicines)300-800mg/L的加倍液中，置于恒溫搖床20-25℃，90-115rpm搖蕩培養(yǎng)48-60hr。愈傷組織加倍液配方為N6+2，4-D 1.0-3.0mg/L+6-BA0.1--0.5mg/L+NAA0.5-1.5mg/L+Sucrose3％-5％+Colchicine300-800mg/L，pH6.0。加倍處理完畢后，用無菌水沖洗愈傷組織3-4次，接入上述配方中培養(yǎng)7-10天。
d-2.叢生芽加倍處理經胚挽救萌發(fā)的幼苗，在叢生芽培養(yǎng)基2/3MS+6BA 2.0-3.0mg/L+KT1.0-3.0mg/L+NAA 0.2-0.5mg/L+sucrose3-6％，agar0.6-1.0％。將高度在2cm以下的小芽切下來，接種至含有秋水仙素的叢生芽加倍液中，于恒溫搖床20-25℃，90-115r/min振蕩培養(yǎng)48-60hr。叢生芽加倍液為1/2MS+6BA 2.0mg/L+KT2.0mg/L+NAA 0.3mg/L+Sucrose5％+Colchicines 500mg/L，pH6.0。加倍處理后的小芽用無菌水沖洗3-4次。
e.加倍愈傷組織分化出苗或者加倍叢生芽生長成苗將恢復培養(yǎng)的加倍愈傷組織轉至分化培養(yǎng)基中誘導分化出苗，分化培養(yǎng)基為MS+6BA 1.0-2.0mg/L+KT1.0-3.0mg/L+NAA 0.2-0.5mg/L+Sucrose3-5％+Agar0.6-1.0％，pH6.0?；蛘邔⒓颖短幚砗蟮男⊙拷尤雲采颗囵B(yǎng)基中恢復培養(yǎng)，叢生芽培養(yǎng)基為1/2MS+6BA 2.0mg/L+KT 2.0mg/L+NAA 0.3mg/L+Sucrose3-5％+agar0.6-1.0％，pH6.0。一個星期后轉入新鮮培養(yǎng)基中直至叢芽再生長。
f.生根培養(yǎng)加倍愈傷組織分化出苗和加倍叢芽培養(yǎng)出的叢芽生長到5-15cm時按單個芽苗分開接入生根培養(yǎng)基1/2MS+6BA0.1-0.3mg/L+NAA 0.3-0.7mg/L+Sucrose2-3％+activated carbon 0.01-0.3％+Agar0.6-1.0％，pH6.0中生根。
g.移植培育全部生根成完整小水稻植株達到10cm以上時，先打開瓶塞加入無菌水淹沒培養(yǎng)基表面后置于20-25℃室內散射光下煉苗2天，然后在自來水中徹底洗凈小水稻植株的根系，然后于下午4:00后按單株移植至水稻育秧田中，或者泥缽中，保持1cm左右淺水用弓架支撐薄膜外置遮陽網。移植的第2、3、4天的中午用噴霧器噴灑1/10MS大量元素于移植秧苗上既保濕又增加營養(yǎng)，4-5天后揭開薄膜，7天后揭去遮陽網，90％以上加倍水稻苗能成活。
h.加倍水稻植株的鑒定鑒定可分為形態(tài)學鑒定，細胞學鑒定和分子標記鑒定。
h-1.形態(tài)學鑒定在水稻抽穗期對加倍植株進行觀測，對莖稈粗壯、籽粒變大、可結實或結實率提高的植株分別掛牌，成熟期考察它們的株高、莖粗、粒長、粒寬、芒長、芒色、落粒性、結實率。將那些莖稈粗壯、籽粒變大、可結實或結實率提高、不易落粒的植株初步確定為加倍成功的同源異源多倍體水稻。
h-2.細胞學鑒定包括兩個部分一個染色體數(shù)目的觀察，二是應用GISH(基因組原位雜交)技術檢查所獲雜種及其多倍體水稻根尖染色體的基因組構成。染色體數(shù)目觀察制片采用去壁低滲火焰干燥法，包括取材、固定、水洗酶解低滲、制片染色和制片觀察五個步驟。GISH包括實驗材料采取、染色體制片、基因組DNA提取及探針制備、原位雜交、雜交后制片的洗脫與信號檢測、圖象處理六個步驟。同源異源六倍體的染色體數(shù)目為2n＝6x＝AAAABB＝72，GISH觀察的基因組構成為2n＝6x＝AAAABB＝72(32-44條帶藍色熒光來自A基因組的染色體，16-22條帶紅色熒光來自B基因組的染色體，并有4-16條帶藍、紅區(qū)段分布的來自AB基因組部分同源的染色體)。
h.分子標記鑒定采用CTAB法提取亞洲栽培稻品種HN2026-2x及Sg99012-4x、斑點野生稻O.punctata-2x、異源雜種、同源異源多倍體的總DNA。用A基因組B基因組特別序列為引物。經PCR擴增其反應程序為94℃預熱5分鐘，94℃變性30秒，54℃退火30秒，72℃延伸20秒，循環(huán)30次再置于72℃保護8分鐘，進入4℃保持待測，經瓊脂糖凝膠電泳后觀察DNA譜帶，記錄帶型并照相。將具有A和B基因組帶型的單株確定為雜種，并根據A基因組帶型標記量的多少而確定同源異源多倍體。最后綜合三種鑒定結果確定已加倍的水稻植株是同源異源六倍體或同源異源八倍體。
本發(fā)明所產生的同源異源六倍體水稻AAApApBB和同源異源八倍體水稻AAApApApApBB具有以下積極效果1.建立了選育同源異源多倍體水稻的技術體系；2.創(chuàng)造了兩個自然界并未存在的水稻類型；3.充分利用了存在于BB基因組中的野生稻有利基因，強抗逆性、強分蘗性與優(yōu)質性；4.充分利用PMeS品系的減數(shù)分裂穩(wěn)定性和高結實性以提高同源異源多倍體的結實率；5.充分利用AA基因組存在的籽粒大、不易落粒的優(yōu)點；6.達到利用遠緣雜交和多倍體雙重優(yōu)勢選育新型多倍體超級稻品種或雜種的目的。
具體實施例方式
下面以實施例對本發(fā)明進一步說明實施例1同源異源六倍體水稻DHI238的選育a.選擇親本以異源四倍體(AsAsBB)Cw008-4x為母本，以PMeS品系HN2026-2x為父本各選5株。
b.雜交和激素處理以Cw008-4x為母本，在開花盛期的早晨7:30開始選擇適宜稻穗，通過剪去1/3穎殼，用鑷子去除花藥，套袋。然后噴加激素混合液(2，4-D+GA3)，稍晾干，在10:30左右取HN2026-2X正要開花的稻穗為父本，置于去雄稻穗的雜交袋上待父本穎花開放時用手輕輕抖動，使花粉盡量多地散落在母本的柱頭上，一般需用3穗父本提供，將雜交袋口折疊，夾好回形針，于當日下午4:00左右和第二天、第三天各噴灑激素混合液于雜交稻穗上，以促進雜種胚胎的發(fā)育。
c.胚挽救培養(yǎng)取雜交授粉后7-10天的幼嫩谷粒，剝去穎殼，經正常消毒程序后將帶有雜種胚胎已膨大的子房接種到胚挽救培養(yǎng)基(如前所述)中，25℃光照12hr下培養(yǎng)，共接入20個子房，12個子房形成愈傷組織。
d.染色體加倍將12塊愈傷組織轉入2個裝有愈傷組織加倍液的三角瓶中，置入恒溫搖床，20℃，105rpm振蕩培養(yǎng)48hr。愈傷組織加倍液配方為N6+2，4-D 2.0mg/L+6BA0.5mg/L+Sucrose 5％+Colchicines 500mg/L，PH6.0。
e.加倍愈傷組織分化出苗加倍處理完畢后，無菌取出愈傷組織，用無菌水沖洗三次，接入誘導培養(yǎng)基(除了沒有Colchicines并添加0.75％agar外，配方與愈傷組織加倍液相同)中恢復7天，愈傷組織再呈旺盛生長狀態(tài)，再將它們轉至分化培養(yǎng)基基中分化出苗。分化培養(yǎng)基為MS+6-BA1.0mg/L+KT2.0mg/L+NAA0./L+Sucrose3％+agar0.75％，pH6.0。在25℃、光照12hr，培養(yǎng)18天時12個愈傷組織中已有4個分化出苗，分化率為33.3％，移走分化苗后的愈傷組織經擴增形成52個，總共為56個愈傷組織，共獲126株分化苗，單塊愈傷組織分化出苗數(shù)為2.25。
f.生根培養(yǎng)將3cm以上的芽苗轉入生根培養(yǎng)基1/2MS+6BA0.5/L+Sucrose2％+activated carbon 0.02％+agar0.75％，pH6.0。置于25℃，光照12hr條件下培養(yǎng)生根。126個芽苗在培養(yǎng)25天后有120株分化生根，生根率93.6％。
g.移植培育將f中獲得的120株已有10cm左右的加倍雜交水稻試管苗中的培養(yǎng)瓶塞打開，添加無菌水淹沒培養(yǎng)基表面，置于20℃散射光的實驗臺上煉苗2天后，用自來水徹底清洗試管苗根系，于下午4:00(當時氣溫24℃)分單株插于育秧田中，外蓋一層薄膜和一層遮陽網，此后的第2、3、4天中午用1/10MS大量元素噴灑加倍雜種水稻秧苗。一星期后揭開遮陽網和薄膜，20天后統(tǒng)計成活稻株為108株，成活率為90.0％。
h.加倍水稻植株的鑒定h-1.形態(tài)學鑒定開花期發(fā)現(xiàn)莖稈粗壯同源異源六倍體(直徑2.48cm)、異源四倍體(1.27cm)；劍葉面積變大同源異源六倍體(27.20×2.75)、同源異源四倍體(18.75×1.82)；籽粒增大同源異源六倍體(1.12×10.32)、異源同源四倍體(0.84×10.27)；粒重增加異源六倍體(千粒重35.2g)比異源四倍體(26.2g)明顯增重。
h-2.細胞學鑒定對初定的已加倍成同源異源六倍體植株的根尖染色體觀察計數(shù)，為2n＝6x＝72，未加倍的植株為2n＝3x＝36；GISH技術證明異源六倍體根尖染色體，由AAAABB組成，其中20-22條染色體紅色探針標記說明為B基因組染色體，40-44條染色體顯示藍色為A基因組染色體，4條到8條染色體呈藍、紅嵌合區(qū)段方式，說明它們?yōu)锳、B部分同源染色體。
h-3.分子標記鑒定抽提同源異源六倍體和其親本異源四倍體和HN2026-2x的DNA，用A、B基因組特異性標記引物，經PCR擴增，瓊脂糖凝膠電泳后發(fā)現(xiàn)異源六倍體明顯具有A基因組和B基因組特有的標記，比具有異源四倍體的A基因組多一條帶。
實施例2.同源異源八倍體水稻DHI237的選育a.選擇親本以異源四倍體Cy301-4x(AsAsBB)為親本之一，以PMeS品系Sg99012-4x為另一親本各選5株。
b.雜交和激素處理以Cy301-4x為母本、Sg99012-4x為父本，采用與實施例1的方法進行雜交和激素處理。
c.胚挽救培養(yǎng)采用實施例1的相同方法，接入幼嫩子房28個，形成10個愈傷組織，誘導率為35.7％。
d.染色體加倍將10塊愈傷組織轉入愈傷組織加倍液中，按實施例1的方法培養(yǎng)。
e.加倍愈傷組織分化出苗10個愈傷組織在如實施例1的相同分化條件下培養(yǎng)分化出5個芽苗，分化率達到50％；取出小苗后的愈傷組織再分化，從總共56塊愈傷組織中分化出176株芽苗，增殖倍數(shù)3.14。
f.生根培養(yǎng)在與實施例1相同的生根培養(yǎng)基中152株芽苗有137株生根，生根率為90.13％。
g.移栽培育以實施例1相同技術將來自f的137株小苗移植于秧田中共存活125株，成活率為91.24％。
h.加倍水稻植株的鑒定h-1.形態(tài)學鑒定根據莖稈變粗、葉片增大、可以結實、籽粒增大的特點，初步選定72株為加倍形成的同源異源八倍體。
h-2.細胞學鑒定對加倍形成的同源異源八倍體植株根尖進行染色體計數(shù)發(fā)現(xiàn)它們?yōu)?n＝8X＝96；基因組構成為ApApApApApApBB。
h-3.分子標記鑒定用與實施例1相同的方法發(fā)現(xiàn)A、B基因組標記同存于加倍雜種中。
權利要求
1.一種同源異源多倍體水稻選育方法，包括同源異源六倍體(AsAsApApBB)水稻和同源異源八倍體(AsAsApApApApBB)水稻的選育方法，其特征在于過程為a.選擇親本，b.雜交與激素處理，c.胚挽救培養(yǎng)，d.染色體加倍，e.加倍愈傷組織，分化出苗或加倍叢芽生長成苗，f.生根培養(yǎng)，g.移植培育，h.加倍水稻植株的鑒定。
2.根據權利要求1所述的同源異源多倍體水稻選育方法，其特征在于具體過程為a.選擇親本選擇優(yōu)良亞洲栽培稻(AA基因組)品種二倍體與斑點野生稻(Oryzapunctata，BB基因組)二倍體雜交加倍培育或栽培稻四倍體與斑點野生稻四倍體雜交形成的異源四倍體AABB為親本，以具有多倍體減數(shù)分裂穩(wěn)定性(PMeS，Polyploid Meiosis Stability)品系HN2026、Sg99012及其衍生系的二倍體和四倍體為另一親本；b.雜交與激素處理雜交以異源四倍體AABB為母本，以PMeS品系為父本，采用剪穎去雄，在授粉前1.5-2小時往柱頭上噴灑混合激素溶液(2，4-D 0.02-0.05mg/L+GA30.03-0.06mg/L)，稍稍晾干，剪取開花剛開始的父本稻穗置于母本稻穗上方，輕輕抖動使花粉盡可能多的散落到柱頭上，授粉后的當天下午4時后往雜交穗時噴灑混合激素一次，第2、3天下午各噴灑一次，以促進雜交胚胎發(fā)育；C.胚挽救培養(yǎng)取授粉后7-10天的幼嫩谷粒，剝去穎殼，經消毒處理后接種于胚挽救培養(yǎng)基種中，25℃暗培養(yǎng)，胚挽救培養(yǎng)基配方為N6+6-BA 0.3-0.7mg/L+NAA0.3-1.0mg/L+CH50-100mg/L+Sucrose3-5％+Agar0.75％，pH6.0；d.染色體加倍在胚挽救培養(yǎng)過程中，部分幼胚經萌發(fā)生長出芽，另一部分則誘導出愈傷組織；因此以愈傷組織和叢芽兩種途徑誘導染色體加倍；d-1.愈傷組織加倍處理取生長旺盛，淺黃色具顆粒狀表面的愈傷組織接入含有秋水仙素(Colchicines)300-800mg/L的加倍液中，置于恒溫搖床20-25℃，90-115rpm搖蕩培養(yǎng)48-60hr，愈傷組織加倍液配方為N6+2，4-D 1.0-3.0mg/L+6-BA0.1-0.5mg/L+NAA0.5-1.5mg/L+Sucrose3-5％+Colchicines300-800mg/L，pH6.0，加倍處理完畢后，用無菌水沖洗愈傷組織3-4次，接入上述配方中培養(yǎng)7-10天；d-2.叢生芽加倍處理經胚挽救萌發(fā)的幼苗，在叢生芽培養(yǎng)基(2/3MS+6BA 2.0-3.0mg/L+KT1.0-3.0mg/L+NAA 0.2-0.5mg/L+sucrose3-6％+agar0.6-1.0％)中擴增叢芽，將高度在2cm以下的小芽切下來，接種至含有秋水仙素的叢生芽加倍液中，于恒溫搖床20-25℃，90-115r/min振蕩培養(yǎng)48-60hr，叢生芽加倍液為1/2MS+6BA2.0mg/L+KT 2.0mg/L+NAA 0.3mg/L+Sucrose5％+Colchicines 500mg/L，pH6.0，加倍處理后的小芽用無菌水沖洗3-4次；e.加倍愈傷組織分化出苗或者加倍叢生芽生長成苗將恢復培養(yǎng)的加倍愈傷組織轉至分化培養(yǎng)基中誘導分化出苗，分化培養(yǎng)基為MS+6BA 1.0-2.0mg/L+KT1.0-3.0mg/L+NAA 0.2-0.5mg/L+Sucrose3-5％+Agar0.6-1.0％，pH6.0，或者將加倍處理后的小芽接入叢生芽培養(yǎng)基中恢復培養(yǎng)，叢生芽培養(yǎng)基為1/2Ms+6BA 2.0mg/L+KT 2.0mg/L+NAA 0.3mg/L+Sucrose3-5％+agar0.6-1.0％，pH6.0，一個星期后轉入新鮮培養(yǎng)基中直至叢芽再生長；f.生根培養(yǎng)加倍愈傷組織分化出苗和加倍叢芽培養(yǎng)出的叢芽生長到5-15cm時按單個芽苗分開接入生根培養(yǎng)基1/2MS+6BA0.1-0.3mg/L+NAA0.3-0.7mg/L+Sucrose2-3％+activated carbon 0.01-0.3％+Agar0.6-1.0％，pH6.0中生根；g.移植培育全部生根的完整小水稻植株生長到10cm以上時，先打開瓶塞加入無菌水于室內散射光下煉苗2天，在自來水中徹底洗凈小水稻植株的根系，然后于下午4:00后按單株移植至水稻育秧田或泥缽中，保持1cm左右淺水，用弓架支撐薄膜外置遮陽網，移植的第2、3、4天中午噴灑1/10MS大量元素于移植秧苗上既保濕又增加營養(yǎng)，4-5天后揭開薄膜，7天后揭去遮陽網，90％以上加倍水稻苗能成活；h.加倍水稻植株的鑒定鑒定可分為形態(tài)學鑒定、細胞學鑒定和分子標記鑒定；h-1.形態(tài)學鑒定在水稻抽穗期對加倍植株進行觀測，對莖稈粗壯、籽粒變大、可結實或結實率提高的植株分別掛牌，成熟期考察它們的株高、莖粗、粒長、粒寬、芒長、芒色、落粒性、結實率，將那些莖稈粗壯、籽粒變大、可結實或結實率提高、不易落粒的植株初步確定為加倍成功的同源異源多倍體水稻；h-2.細胞學鑒定包括兩個部分一個染色體數(shù)目的觀察，二是應用GISH(基因組原位雜交)技術檢查所獲雜種及其多倍體水稻根尖染色體的基因組構成，染色體數(shù)目觀察制片采用去壁低滲火焰干燥法，包括取材、固定、水洗酶解低滲、制片染色和制片觀察五個步驟，GISH包括實驗材料采取、染色體制片、基因組DNA提取及探針制備、原位雜交、雜交后制片的洗脫與信號檢測、圖象處理六個步驟，同源異源六倍體的染色體數(shù)目為2n＝6x＝AAAABB＝72，GISH觀察的基因組構成為2n＝6x＝AAAABB＝72(32-44條帶藍色熒光來自A基因組的染色體，16-22條帶紅色熒光來自B基因組的染色體，并有4-16條帶藍、紅區(qū)段分布的來自AB基因組部分同源的染色體)；h.分子標記鑒定采用CTAB法提取亞洲栽培稻品種HN2026-2x及Sg99012-4x、斑點野生稻O.punctata-2x、異源雜種、同源異源多倍體的總DNA，以A基因組B基因組特別序列為引物，經PCR擴增，其反應程序為94℃預熱5分鐘，94℃變性30秒，54℃退火30秒，72℃延伸20秒，循環(huán)30次再置于72℃保護8分鐘，進入4℃保持待測，經瓊脂糖凝膠電泳后觀察DNA譜帶，記錄帶型并照相，將具有A和B基因組帶型的單株確定為雜種，并根據A基因組帶型標記量的多少而確定同源異源多倍體，最后綜合三種鑒定結果確定已加倍水稻植株為同源異源六倍體或同源異源八倍體。
全文摘要
本發(fā)明提出了通過遠緣雜交和生物技術創(chuàng)建同源異源多倍體水稻的方法。它包括a.選擇親本，b.雜交與激素處理，c.胚挽救培養(yǎng)，d.染色體加倍，e.加倍愈傷組織分化出苗或加倍叢芽生長成苗，f.生根培養(yǎng)，g.移栽培育，h.加倍水稻植株的鑒定等八個步驟。創(chuàng)建的同源異源多倍體水稻有兩種，一種是以異源四倍體A
文檔編號A01H1/04GK101044836SQ20071005200
公開日2007年10月3日 申請日期2007年4月28日 優(yōu)先權日2007年4月28日
發(fā)明者侯明輝, 朱姣姣, 萬春春, 陳冬玲, 宋兆建, 蔡得田 申請人:湖北大學