專利名稱：枯草桿菌的殺菌劑或土壤改良劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明系為 一種枯草桿菌的殺菌劑或土壤改良劑的制作方法，尤指 有關(guān)于培養(yǎng)枯草桿菌及后續(xù)將培養(yǎng)液制作成液劑型或粉劑型或其它劑型 的殺菌劑或土壤改良劑的方法，其殺菌劑來源為生物，故亦可稱為生物 殺菌劑。10背景技術(shù)枯草桿菌是一種會產(chǎn)生孢子且具多種功能的菌林，其不同分離抹過 去多用于生產(chǎn)酵素或抗生素等。本發(fā)明將其用于生產(chǎn)殺菌劑或土壤改良 劑。本發(fā)明顯示枯草桿菌的分離株在培養(yǎng)后得到的孢子及代謝物質(zhì)可做 15 為農(nóng)藥用于植物病害防治(如豌豆白粉病)及改良土壤菌相促進(jìn)植物生長。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的在于提出一種可做為農(nóng)藥用于植物病害防治(如豌豆白粉 病)及改良土壤菌相促進(jìn)植物生長的枯草桿菌的殺菌劑或土壤改良劑的制20 作方法。一種枯草桿菌的殺菌劑或土壤改良劑制作方法，其特征在于 利用淀粉、蛋白質(zhì)、糖蜜、酵母粉、玉米浸泡液、(NH4)2S04 、K2HP04 、MgS(V7H20 、 CaCl2*2H20及MnS04.H20作為培養(yǎng)基，并經(jīng)由下列制作步驟 b. 發(fā)酵槽因枯草桿菌為好氣性，需消耗大量氧氣以維持成長，故 在液態(tài)發(fā)酵時應(yīng)以攪拌通氣式或相當(dāng)之高供氧量的發(fā)酵槽培養(yǎng)之；c. 培養(yǎng)基質(zhì)系由最適當(dāng)?shù)牡矸?-40公克/公升、蛋白質(zhì)3-24公克/ 公升、糖蜜l-8公克/公升、酵母粉1.5-12.0公克/公升、玉米浸泡液0.5-4.05公克/公升、(NH4)2S04 0.3-2.4公克/公升、K2HP04 0.4-3.2公克/公升、 MgS04*7H20 0.2畫1.6公克/公升、CaCl2'2H20 10-80毫克〃^升、MnS04'H20 6-48毫克/公升所組成；d. 發(fā)酵操作其操作條件為溫度20 40°C、 Ph6.0~8.0、溶解氧氣濃 度維持在30%以上飽和度；io e.濃縮系將培養(yǎng)液以真空濃縮除去水份制成濃縮液，其操作壓力在0.5大氣壓以下，其溫度在60。C以下，而較佳的壓力在O.l氣壓以下， 其溫度在40。C以下，最佳的壓力在0.01氣壓以下，其溫度在35。C以下；f. 液劑制劑經(jīng)過真空濃縮后的濃縮液添加適當(dāng)及適量的添加劑， 并調(diào)節(jié)水份使孢子濃度達(dá)到既定的產(chǎn)品規(guī)格，即可制成液劑產(chǎn)品并具殺15 菌或土壤改良劑的功能；g. 噴霧干燥真空濃縮后的濃縮液以噴霧干燥機(jī)完全除去水份，噴 霧出口溫度70。C以下可維持孢子的活性；h. 粉劑制劑即以噴霧干燥方式除去水份制成粉末，并可添加適當(dāng) 及適量的載劑、佐劑或稀釋劑，并調(diào)節(jié)孢子數(shù)量達(dá)到既定的產(chǎn)品規(guī)格，20即可制成粉劑產(chǎn)品；以及I.其它制劑其它劑型(如錠劑、乳劑等)可由液劑或粉劑加工衍生而得。本發(fā)明的有益效果在于主要系利用一種枯草桿菌的分離抹在發(fā)酵槽中以特別調(diào)配的培養(yǎng)基 25質(zhì)在特定的操控條件下進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)至末期當(dāng)孢子生成后，將培養(yǎng)液 真空濃縮以除去水^盼。濃縮液經(jīng)適當(dāng)調(diào)配后可制成液劑型殺菌或土壤改 良劑。濃縮液再經(jīng)噴霧干燥可制得粉體，此粉體經(jīng)適當(dāng)調(diào)配后可制成粉 型殺菌劑或土壤改良劑。其它劑型(如錠劑、乳劑等)可由液劑或粉劑加工 衍生而得。根據(jù)該方法制得的產(chǎn)品可做為農(nóng)藥用于植物病害防治(如豌豆 5 白粉病)及改良土壤菌相促進(jìn)植物生長。附困的簡要說明


圖1為本發(fā)明枯草桿菌的殺菌劑或土壤改良劑的制作方法流程圖 10主要組件符號說明A菌種B發(fā)酵槽C培養(yǎng)基質(zhì)D發(fā)酵操作E真空濃縮F液劑制劑G噴霧干燥H粉劑制劑I其它制劑具體實(shí)施方式
本發(fā)明系為 一種枯草桿菌的殺菌劑或土壤改劑制作方法，主要系利用淀粉、蛋白質(zhì)、糖蜜、酵母粉、玉米浸泡液(com steep liquor)、 (NH4)2S04、 K2HP04、 MgS04*7H20、 CaCl2*2H20及MnS04*H20作為培養(yǎng)基，并經(jīng)由 25 下列制作步驟
請參閱
圖1所示1. 菌種A:取適合于生產(chǎn)殺菌劑或土i裏改良劑的枯草桿菌的分離抹。所述分離 抹可以在市場購得，即在臺灣食品工業(yè)發(fā)展研究所中的生物資源保存及 5 研究中心(BCRC, Bioresource Collection Research Center)購得。BCRC number: 14199、 10259、 10258、 10257。2. 釀發(fā)酵槽B:枯草桿菌為好氣性，需消耗大量氧氣以維持成長，故在液態(tài)發(fā)酵時 io 應(yīng)以攪拌通氣式或相當(dāng)之高供氧量的發(fā)酵槽B培養(yǎng)之。本發(fā)明以容量50 公升至50000公升(50頓)的大型工業(yè)用液態(tài)攪拌通氣式發(fā)酵槽B為例培 養(yǎng)枯草桿菌，在此容量范圍之外的發(fā)酵槽B亦可應(yīng)用。3. 培養(yǎng)基質(zhì)C:is 本發(fā)明的培養(yǎng)基質(zhì)C曾經(jīng)過最適化研究決定適當(dāng)?shù)奶?氮比(C/N ratio)與其它微量養(yǎng)份的比例，以促進(jìn)枯草桿菌的均衡生長(balanced growth)及 孢子與代謝物質(zhì)的生成。該最適化的培養(yǎng)基質(zhì)C各成份比例為淀粉5公 克蛋白質(zhì)3公克糖蜜l公克酵母粉1.5公克玉米浸泡液(corn steep liquor)0.5公克(NH4)2SO40.3公克K2HPO4 0.4公克MgS04'7H20 0.220公克CaCl2*2H20 10毫克MnS04*H20 6毫克。適合菌體生長的培養(yǎng)基質(zhì)C的組成范圍為淀粉5-40公克/公升、蛋白 質(zhì)3-24公克/公升、糖蜜l-8公克/公升、酵母粉1.5-12.0公克/公升、玉米 浸泡液0.5-4.0公克/公升、(NH4)2S04 0.3-2.4公克/公升、K2HP04 0.4-3.2 公克/公升、MgS04*7H20 0.2-1.6公克/公升、CaCl2*2H20 10-80毫克/公升、25 MnS04*H20 6-48毫克/公升。枯草桿菌在濃度低于此組成的培養(yǎng)基質(zhì)中生 長遲緩在濃度高于此組成的培養(yǎng)基中生長受抑制?？色@得較快速生長的較佳培養(yǎng)基質(zhì)C組成范圍為淀粉15-30公克/公 升、蛋白質(zhì)9-18公克/公升、糖蜜3-6公克/公升、酵母粉4.5-9.0公克/公 升、玉米浸泡液1.5-3.0公克/公升、(NH4)2SO4 0.9-1.8公克/公升、K2HP04 51.2-2.4公克/公升、MgS04*7H20 0.6-1.2公克/公升、CaCl2*2H20 30-60毫 克/公升、MnS04'H20 18-36毫克/公升?？色@得較快速生長的較佳培養(yǎng)基質(zhì)組成范圍為淀粉20-25公克/公升、 蛋白質(zhì)12-15公克/公升、糖蜜4-5公克/公升、酵母粉6.0-7.5公克/公升、 玉米浸泡液2.0-2.5公克/公升、(NH4)2S04 1.2-1.5公克/公升、K2HP04 io1.6-2.0公克/公升、MgS04'7H20 0.8-1.0公克/公升、CaCl2*2H20 40-50毫 克/公升、MnS04 .H20 24-30毫克/公升?？捎玫牡矸廴缬衩椎矸?、小麥淀粉、稻米淀粉、樹薯淀粉?？捎玫?蛋白質(zhì)如大豆蛋白、干酪粉(casein)、乳清蛋白。使用不同的淀粉或蛋白 質(zhì)效果差異不大。酵母粉提供枯草桿菌必要的生長因子(growth factor)以 15 促菌體產(chǎn)生孢子及代謝物質(zhì)，故為本發(fā)明的培養(yǎng)基質(zhì)C中重要不可缺的 部份?？莶輻U菌在缺乏酵母粉的培養(yǎng)基質(zhì)C中發(fā)育不佳，不適合做為殺 菌劑或土壤改良劑。糖蜜、酵母粉及玉米浸泡液中原已含有微量元素， 但含量不足，故在本發(fā)明的培養(yǎng)基質(zhì)C中添加無機(jī)鹽類補(bǔ)充之。20 4.酸發(fā)酵操作D:配合前述最適化的培養(yǎng)基質(zhì)C，在下述調(diào)整后的操作條件下進(jìn)行發(fā) 酵，在所有曾進(jìn)行過的試驗(yàn)中可得枯草桿菌孢子與代謝物質(zhì)的最大產(chǎn)量。 發(fā)酵槽B中的培養(yǎng)基質(zhì)C占發(fā)酵槽總體積最多70%,預(yù)留的上層空 間可容納液面的泡沫及避免液體因攪拌而濺出。培養(yǎng)基質(zhì)以12 rc的飽和 25 蒸氣殺菌。培養(yǎng)基質(zhì)C維持在12rc的時間視發(fā)酵槽B的大小而改變，
但以最短可行的時間為準(zhǔn)，以免培養(yǎng)基質(zhì)受熱過久而變性。本發(fā)明顯示50公升發(fā)酵槽B維持在121。C的時間以20分鐘以內(nèi)較佳，500公升發(fā)酵 槽25分鐘以內(nèi)較佳，5噸發(fā)酵槽40分鐘以內(nèi)較佳。在培養(yǎng)基質(zhì)C的蒸 氣殺菌過程中，以發(fā)酵槽B附屬的控制計算機(jī)自動進(jìn)行通蒸氣、升溫、 5維持恒溫、降溫、通冷卻水、通氣、閥開關(guān)等程序。取自4。C冷藏的培養(yǎng)亞中不需經(jīng)熱震(heat shock)活化的菌種孢子經(jīng) 搖瓶或小型發(fā)酵槽B等方式擴(kuò)大培養(yǎng)為種菌后接種至大型工業(yè)發(fā)酵槽 中。發(fā)酵操作D溫度為20-40°C,在此范圍之外菌體生長遲緩?？色@得較 io 快速生長的較佳溫度為24-36°C?？色@得較快速生長的較佳溫度為 28-32°C。孢子生產(chǎn)期(sporulationphase)的溫度維持在30-32。C較佳。發(fā)酵液的pH以已另行滅菌的酸液及堿液(如硫酸及氫氧化鈉液)維持 在5.5-8.5，在此pH范圍之外菌體生長受抑制。可獲得較快速生長的較佳 pH為6.0-8.0。可獲得較快速生長的較佳pH為6.5-7.5。在此生長過程中 15 由遲滯期(lag phase)至營養(yǎng)生長期(vegetative growth phase)的中段，pH下 降，須添加堿液維持之；由營養(yǎng)生長期的中段至孢子生產(chǎn)期，pH回升， 須添加酸液維持之。發(fā)酵液中的溶解氧氣濃度(DO)維持在30%飽和度以上，在此飽和度 之下菌體生長受抑制且有溶菌(菌體分解)現(xiàn)象?？色@得較快速生長的較佳 20 DO為50。/o飽和度以上。可獲得較快速生長的較佳DO為70%飽和度以上。 在生長過程中，由遲滯期至營養(yǎng)生長期的中段，DO下降；由營養(yǎng)生長期 的中段至孢子生產(chǎn)期，DO回升。此現(xiàn)象與pH的變化一致。DO飽和度 可由攪拌速率及/或通氣量調(diào)節(jié)之。攪拌速率/或通氣量增加，DO飽和度 提升；反之下降。25 發(fā)酵槽B攪拌速率以維持最大為原則，以提升發(fā)酵液的DO飽和度。
其數(shù)值依槽體大小而改變?？砂锤鞑垡?guī)格操作說明書所列最大容許攪拌率的80%(攪拌速率可改變時)或發(fā)酵槽B原廠設(shè)定的固定攪拌速率操作， 如50乂/^升槽可為300rpm, 500^^升槽可為lOOrpm, 5 p屯槽可為20rpm。高攪拌速率產(chǎn)生的強(qiáng)大剪應(yīng)力可將首尾連接成串的數(shù)個細(xì)胞分離成單獨(dú) 5 個體，但對菌體的發(fā)育無不良影響。當(dāng)發(fā)酵槽B在上述之?dāng)嚢杷俾氏虏僮鲿r，經(jīng)過濾除菌后的空氣的通 氣量由設(shè)定發(fā)酵液的DO飽和度下限后經(jīng)發(fā)酵槽B附屬的控制計算機(jī)調(diào) 節(jié)之。在生長過程中，由遲滯期至營養(yǎng)生長期的中段，通氣量增加以維 持設(shè)定的DO飽和度下限；由營養(yǎng)生長期的中段至孢子生產(chǎn)期，通氣量 io 回降。此現(xiàn)象與pH的變化一致。在大型發(fā)酵槽B中，因攪拌速率有限， 在營養(yǎng)生長期的中段菌體需氧量最大時，通氣量可能增加至設(shè)備操作容 量的上限。在發(fā)酵培養(yǎng)的過程中，因攪拌及通氣和培養(yǎng)基質(zhì)含蛋白質(zhì)之故，會 在發(fā)酵液面產(chǎn)生大量泡沫。故應(yīng)激活發(fā)酵槽B附屬的自動消泡設(shè)備添加15 已另行滅菌之消泡劑消除泡沫?？捎玫南輨┛蔀楣栀|(zhì)(silicon-based)或 脂質(zhì)(lard),并可經(jīng)適當(dāng)?shù)南♂?。發(fā)酵過程可于80-95%的細(xì)胞產(chǎn)生孢子并且細(xì)胞破裂釋放出成熟的自 由孢子后結(jié)束。本發(fā)明顯示更高的產(chǎn)孢率不易達(dá)成且費(fèi)時，不符發(fā)酵槽 操作的經(jīng)濟(jì)效益。發(fā)酵培養(yǎng)的全程操作時間視發(fā)酵槽B的大小而改變。加本發(fā)明顯示50公升發(fā)酵槽B全程操作時間在20小時以內(nèi)，500公升發(fā) 酵槽B在23小時以內(nèi)，5噸發(fā)酵槽B在25小時以內(nèi)，50噸發(fā)酵槽在26 小時以內(nèi)。5.真空濃縮E :25 發(fā)酵完成后培養(yǎng)液以真空濃縮E除去水份。真空濃縮機(jī)的操作條件
為真空度在0.5大氣壓(atm)，較佳的真空度在O.l大氣壓以下，最佳的真 空度在O.Ol大氣壓以下；培養(yǎng)液的沸點(diǎn)在60。C以下，較佳的沸點(diǎn)在40。。 以下，最佳的沸點(diǎn)在35。C以下，除去水份可提高滲透壓以保持產(chǎn)品的新 鮮及延長保存期。56. 液劑制劑F:真空濃縮后的濃縮液添加適當(dāng)及適量的添加劑，并調(diào)節(jié)水份使孢子 濃度達(dá)到既定的產(chǎn)品規(guī)格，即可制成液劑產(chǎn)品?？捎玫奶砑觿┲辽侔?防腐劑、調(diào)節(jié)pH的酸液或堿液。此液劑產(chǎn)品具殺菌或土壤改良劑的功〗o 能。7. 噴霧千燥G:真空濃縮E后的濃縮液以噴霧干燥機(jī)完全除去水份。噴霧出口溫度 70°C以下可維持孢子的活性。158. 粉劑制劑H:噴霧干燥G后的粉體添加適當(dāng)及適量的載劑、佐劑或稀釋劑，并調(diào) 節(jié)孢子數(shù)量達(dá)到既定的產(chǎn)品規(guī)格，即可制成粉劑產(chǎn)品?？捎玫脑詣?、佐 劑或稀釋劑至少包含木屑、翁土粉、接口活性分散展著劑。此粉劑產(chǎn)品 20 具殺菌產(chǎn)品或土壤改良劑的功能。9. 其它制劑I:其它劑型(如錠劑、乳劑等)可由液劑或粉劑加工衍生而得。25實(shí)施例1培養(yǎng)枯草桿菌的方法 首先，冷藏于4。C的PDA培養(yǎng)皿上的枯草桿菌孢子以搖瓶培養(yǎng)活化。 搖瓶底部可附凹槽以增加強(qiáng)氧氣傳送及攪拌的效果。搖瓶中的培養(yǎng)基(以 下簡稱標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基)組成為玉米淀粉20公克/公升、大豆蛋白12公克/公升、糖蜜4公克/公升、酵母粉6公克/公升、玉米浸泡液2公克/公升、 5(NH4)2S04 1.2公克/公升、K2HP041.6公克/公升、MgS04*7H20 0.8公克/ 公升、CaCV2H2O40毫克/公升、MnS04*H20 24毫克/公升。搖瓶中培養(yǎng) 基的體積以搖瓶容積的1/5為準(zhǔn)，如500毫升的搖瓶內(nèi)裝100毫升的培養(yǎng) 基。搖并瓦置于31士rC及200rpm的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。當(dāng)搖瓶中的培養(yǎng)液的菌體光學(xué)密度(OD，或吸光度Absorbance)達(dá)到 io 0.5以上即可將培養(yǎng)液移轉(zhuǎn)至5公升發(fā)酵槽擴(kuò)大培養(yǎng)。5公升發(fā)酵槽內(nèi)有 3.5公升的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基。以足量的搖,養(yǎng)接種5公升發(fā)酵槽使接種量達(dá) 10%以上。5公升發(fā)酵槽在31±1 。C 、 pH 7.0±0.1及DO 70%飽和度以上的 條件下才喿作。在此DO條件下，發(fā)酵槽攪拌速率在600rpm以上，通氣量 在1公升/分鐘以上。 15 當(dāng)5公升發(fā)酵槽中培養(yǎng)液的菌體DO達(dá)到0.5以上即可將培養(yǎng)液移轉(zhuǎn)至50公升發(fā)酵槽擴(kuò)大培養(yǎng)。50公升發(fā)酵槽內(nèi)有35公升的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基。 50公升發(fā)酵槽31土1。C 、 pH 7.0±0.1及DO 70%飽和度以上的條件下操作。 在此DO條件下，發(fā)酵槽攪拌速率在300rpm以上，通氣量在5公升/分鐘 以上。發(fā)酵可進(jìn)行至最后(約接種后20小時內(nèi))培養(yǎng)基中的養(yǎng)份消耗殆盡、 20 菌體已產(chǎn)生成熟孢子并釋放出菌體外時結(jié)束，培養(yǎng)液可以真空濃縮進(jìn)行 后續(xù)處理。發(fā)酵亦可進(jìn)行至培養(yǎng)液的菌體OD達(dá)到0.5以上做為500公升 發(fā)酵培養(yǎng)的種菌。當(dāng)50公升發(fā)酵槽中培養(yǎng)液的菌體DO達(dá)到0.5以上即可將培養(yǎng)液移 轉(zhuǎn)至500公升發(fā)酵槽擴(kuò)大培養(yǎng)。500公升發(fā)酵槽內(nèi)有350公升的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng) 25基。500公升發(fā)酵槽31士rC、 pH7.0土0.1及DO60。/。飽和度以上的條件下
操作。在此DO條件下，發(fā)酵槽攪拌速率在100rpm以上，通氣量在l5 公升/分鐘以上 發(fā)酵可進(jìn)行至最后(約接種后23小時內(nèi))培養(yǎng)基中的養(yǎng)份 消耗殆盡、菌體已產(chǎn)生成熟孢子并釋放出菌體外時結(jié)束，培養(yǎng)液可以真 空濃縮進(jìn)行后續(xù)處理。發(fā)酵亦可進(jìn)行至培養(yǎng)液的菌體OD達(dá)到0.5以上做5為5000公升(5噸)發(fā)酵培養(yǎng)的種菌。當(dāng)500公升發(fā)酵槽中培養(yǎng)液的菌體DO達(dá)到0.5以上即可將培養(yǎng)液移 轉(zhuǎn)至5000公升發(fā)酵槽擴(kuò)大培養(yǎng)。5000公升發(fā)酵槽內(nèi)有3500公升的標(biāo)準(zhǔn) 培養(yǎng)基。5000公升發(fā)酵槽31士rC、 pH 7.0土0.1及DO 50%飽和度以上的 條件下^喿作。在此DO條件下，發(fā)酵槽攪拌速率在50rpm以上，通氣量io 在30公升/分鐘以上。發(fā)酵可進(jìn)行至最后(約接種后25小時內(nèi))培養(yǎng)基中 的養(yǎng)份消耗殆盡、菌體已產(chǎn)生成熟孢子并釋放出菌體外時結(jié)束，培養(yǎng)液 可以真空濃縮進(jìn)行后續(xù)處理。發(fā)酵亦可進(jìn)行至培養(yǎng)液的菌體OD達(dá)到0.5 以上做為50000公升(50噸)發(fā)酵培養(yǎng)的種菌。當(dāng)5000公升發(fā)酵槽中培養(yǎng)液的菌體DO達(dá)到0.5以上即可將培養(yǎng)液15 移轉(zhuǎn)至50000公升發(fā)酵槽擴(kuò)大培養(yǎng)。50000公升發(fā)酵槽內(nèi)有35000公升的 標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基。5000公升發(fā)酵槽31土rC、 pH 7.0士0.1及DO 50%飽和度以 上的條件下操作。在此DO條件下，發(fā)酵槽攪拌速率在20卬m以上，通 氣量在50公升/分鐘以上。發(fā)酵進(jìn)行至最后(約接種后26小時內(nèi))培養(yǎng)基 中的養(yǎng)4分消耗殆盡、菌體已產(chǎn)生成熟孢子并釋放出菌體外時結(jié)束，培養(yǎng)20 液可以真空濃縮進(jìn)行后續(xù)處理。實(shí)施例2制作成殺菌劑或土壤改良的方法實(shí)施例1中在各不同體積的發(fā)酵槽中完成發(fā)酵的全部培養(yǎng)液以真空 25濃縮除去水份。真空濃縮機(jī)的操作條件為真空度在0.01大氣壓以下；培
養(yǎng)液的沸點(diǎn)在35。C以下。培養(yǎng)液中若有殘留的養(yǎng)份將與培養(yǎng)液一同濃縮， 配制為成品后施用于田間可做為農(nóng)作物的有機(jī)肥料，此做法亦可免除排 放培養(yǎng)液中殘留的養(yǎng)份至廠外污染環(huán)境的問題。添加適量的水份及酸液或堿液至上述濃縮液，使孢子濃度達(dá)到109/ 5毫升以上、pH在7.0士0.5,即可制成液劑產(chǎn)品。上述濃縮液以噴霧干燥機(jī)在噴霧出口溫度70。C以下完全除去水份后 可得粉體。添加適量的黏土粉至此粉體使孢子數(shù)達(dá)到109/公克以上，即可 制成粉劑產(chǎn)品。io實(shí)施例3液劑型枯草桿菌殺菌劑或土壤改良劑田間試驗(yàn)實(shí)例 實(shí)施例2中的液劑產(chǎn)品以水稀釋400或800倍加適量的接口活性分 私艮著劑，若再添加肥料級胺基酸液稀釋1000倍混合靜置3小時以上將 有助于枯草桿菌孢子的活化。將此稀釋混合液以每公畝200公升以上的 15 施用率均勻噴灑于剛發(fā)病的豌豆苗莖葉上，每隔7日施用一次，連續(xù)4 次以上，可防治豌豆白粉病并且植抹生長勢旺盛，結(jié)果期長，果英大而 美麗。試-驗(yàn)詳細(xì)資料如下百泰生物科技股份有限公司田間試驗(yàn)4艮告 84年6月 20 —.試驗(yàn)?zāi)康奶接懣莶輻U菌劑或土壤改良劑4。/。液劑(S)對豌豆白粉病的防治效果二. 試驗(yàn)藥劑枯草桿菌4。/。S三. 試-險i殳計l.試驗(yàn)單位百泰生物科技股份有限公司技術(shù)推廣部 25 2.試驗(yàn)時間84年4月 84年5月3.試-驗(yàn)地點(diǎn)臺中新社 4j式-驗(yàn)作物豌豆5.試-驗(yàn)方法發(fā)病初期開始施藥，以后每隔7天施藥一次，共四次， 噴藥時加展著劑均勻噴施全抹。 5 6.田地設(shè)計采逢機(jī)完全區(qū)集設(shè)計，每小區(qū)40抹，三重復(fù)。7. 藥劑處理A. 枯草桿菌4%S 400XB. 枯草桿菌4%S 800XC. 平克座10.5% 1500X io D.對照區(qū)不施藥8. 施藥曰期A. 84/4/16B. 84/4/23C. 84/4/30 15 D. 84/5/79. 調(diào)查曰期:84/5/1410. 藥效調(diào)查于最后一次施藥后再隔一周調(diào)查，統(tǒng)計罹病抹表列之， 并觀察結(jié)果情形。2025試-瞼藥劑枯草桿菌4%S 枯草桿菌4%S 平克座10.5% 對照組四.試-驗(yàn)結(jié)果稀釋倍數(shù) 400倍 800倍1500倍罹病率4.96.8 3.2 25.6注噴灑枯草桿菌的區(qū)域植抹生長旺盛、結(jié)果期可長達(dá)2個月以上(5 月初至7月初)、果英大而美觀(顏色翠綠光亮)。 五.結(jié)論l.試驗(yàn)期間沒有藥害發(fā)生。 5 2.由以上資料可知枯草桿菌4%S對豌豆白粉病的防治效果佳，并且植株生長旺盛、結(jié)果期長、果英大而美觀。實(shí)施例4粉劑型枯草桿菌劑殺菌劑或土壤改良劑田間實(shí)驗(yàn)例 io 實(shí)例2中的粉劑產(chǎn)品以水稀釋600倍，若再添加肥料級胺基酸液稀釋1000倍混合靜置3小時以上將有助于枯草桿菌孢子的活化。將此稀釋 混合液以每棵500毫升以上的施用率灌注于移植10日的蕃茄苗根部附近 土壤中，每隔7日施用一次，連續(xù)4次以上，可防治蕃茄青枯病并且植 抹生長勢旺盛，結(jié)果期長，果英大而美麗。試驗(yàn)詳細(xì)資料如下 15 百泰生物科技股份有限公司田間試驗(yàn)報告 90年10月一. 試驗(yàn)?zāi)康奶接懣莶輻U菌劑或土壤改良劑50。/o可濕性粉劑(WP)對 蕃茄青枯病的防治效果二. 試驗(yàn)藥劑枯草桿菌50。/。WP 20 三.試-驗(yàn)設(shè)計1. 試驗(yàn)單位百泰生物科技股份有限公司技術(shù)推廣部2. 試驗(yàn)時間卯年7月 90年8月3. 試驗(yàn)地點(diǎn)南投埔里4. 試驗(yàn)作物蕃茄25 5.試驗(yàn)方法于作物移植后10天，土壤灌注，七天一次連續(xù)四次。
6. 田地設(shè)計采逢機(jī)完全區(qū)集設(shè)計，每小區(qū)50林，三重復(fù)。7. 藥劑處理A. 枯草桿菌50%WP 600XB. 氫氧化銅77%WP 800XC. 對照區(qū)不施藥8.施藥曰期:A.90/7/10B.90/7/17C.90/7/24D.90/7/319.調(diào)查日期:A.9CV7/17B.90/7/24C.90/7/31D.90/8/6E.90/8/13F.術(shù)8/20IO.藥效調(diào)查于每次施藥后調(diào)查，統(tǒng)計罹病林表列之，并觀察結(jié)果20 情形。四.試驗(yàn)結(jié)果1. 由于前二次調(diào)查均未發(fā)病故不列表。但觀查到灌注枯草桿菌的區(qū)域 植抹生長勢旺盛。2. 第三次調(diào)查罹病才朱(90/7/31)25 處 理 罹病率123平均
A. 枯草桿菌50%WP 600XB. 氫氧化銅77%WP 800X c.對照不施藥區(qū)000 o 0 2 0 0.6635 3 3.66注灌注枯草桿菌的區(qū)域才直抹生長勢旺盛。 3.第四次調(diào)查罹病株(90/8/6)處 理 罹病率123平均 600X 1 0 0 0.33,X 4 4 5 4.335 8 7 6.67注灌注枯草桿菌的區(qū)域植抹生長勢旺盛，并且植抹果粒大而美觀(色 彩鮮艷亮度高)。4.第五次調(diào)查罹病抹(90/8/13)A. 枯草桿菌50°/。WPB. 氫氧化銅77%WPC. 對照不施藥區(qū)1520處 理A. 枯草桿菌50%WP 600XB. 氫氧化銅77%WP 800XC. 對照不施藥區(qū)^病率1 2 3 平均 120 1.00 8 6 7 7.007 12 12 10.3325注灌注枯草桿菌的區(qū)域植抹生長勢旺盛，并且植株果粒大而美觀(色 彩鮮艷亮度高)。S.第六次調(diào)查罹病林(90/8/13)處 理 罹病率123 平均 A. 枯草桿菌50。/oWP600X 22 1 1.67B. 氫氧化銅77%WP800X 10 8 9 9.00C. 對照不施藥區(qū) 1116 15 14.00注灌注枯草桿菌的區(qū)域植抹生長勢旺盛，并且植抹果粒大而美觀(色 5 彩鮮艷亮度高)。 五.結(jié)論1. 試驗(yàn)期間沒有藥害發(fā)生。2. 由以上資料可知枯草桿菌50%WP對蕃茄青枯病的防治效果佳， 比較對照藥劑差異大，并且植抹生長旺盛、結(jié)果期長(由8月初可持續(xù)采io收至11月以上，平均每林開花8次以上)、果粒大而美觀(色彩鮮艷亮度高)。
權(quán)利要求
1. 一種枯草桿菌的殺菌劑或土壤改良劑制作方法，其特征在于利用淀粉、蛋白質(zhì)、糖蜜、酵母粉、玉米浸泡液、(NH4)2SO4、K2HPO4、MgSO4·7H2O、CaCl2·2H2O及MnSO4·H2O作為培養(yǎng)基，并經(jīng)由下列制作步驟a.菌種取適合于生產(chǎn)殺菌劑或土壤改良劑的枯草桿菌的分離株；b.發(fā)酵槽因枯草桿菌為好氣性，需消耗大量氧氣以維持成長，故在液態(tài)發(fā)酵時應(yīng)以攪拌通氣式或相當(dāng)之高供氧量的發(fā)酵槽培養(yǎng)之；c.培養(yǎng)基質(zhì)系由最適當(dāng)?shù)牡矸?-40公克/公升、蛋白質(zhì)3-24公克/公升、糖蜜1-8公克/公升、酵母粉1.5-12.0公克/公升、玉米浸泡液0.5-4.0公克/公升、(NH4)2SO40.3-2.4公克/公升、K2HPO4 0.4-3.2公克/公升、MgSO4·7H2O 0.2-1.6公克/公升、CaCl2·2H2O 10-80毫克/公升、MnSO4·H2O6-48毫克/公升所組成；d.發(fā)酵操作其操作條件為溫度20～40℃、Ph6.0～8.0、溶解氧氣濃度維持在30％以上飽和度；e.濃縮系將培養(yǎng)液以真空濃縮除去水份制成濃縮液，其操作壓力在0.5大氣壓以下，其溫度在60℃以下，而較佳的壓力在0.1氣壓以下，其溫度在40℃以下，最佳的壓力在0.01氣壓以下，其溫度在35℃以下；f.液劑制劑經(jīng)過真空濃縮后的濃縮液添加適當(dāng)及適量的添加劑，并調(diào)節(jié)水份使孢子濃度達(dá)到既定的產(chǎn)品規(guī)格，即可制成液劑產(chǎn)品并具殺菌或土壤改良劑的功能；g.噴霧干燥真空濃縮后的濃縮液以噴霧干燥機(jī)完全除去水份，噴霧出口溫度70℃以下可維持孢子的活性；h.粉劑制劑即以噴霧干燥方式除去水份制成粉末，并可添加適當(dāng)及適量的載劑、佐劑或稀釋劑，并調(diào)節(jié)孢子數(shù)量達(dá)到既定的產(chǎn)品規(guī)格，即可制成粉劑產(chǎn)品；以及I.其它制劑其它劑型(如錠劑、乳劑等)可由液劑或粉劑加工衍生而得。
2. 如權(quán)利要求1所述的制作方法，其特征在于所述發(fā)酵槽以容量50公 升至50000公升(50噸)的大型工業(yè)用液態(tài)攪拌通氣式培養(yǎng)枯草桿菌。
3. 如權(quán)利要求1所述的制作方法，其特征在于其中液劑制劑的添加劑 io至少包含有防腐劑、調(diào)節(jié)pH的酸液或堿液。
4. 如權(quán)利要求3所述的制作方法，其特征在于含有枯草桿菌的液劑制 劑經(jīng)由濃縮后添加適量水份及酸液或堿液，并調(diào)節(jié)pH為7.0±0.5，使其 孢子濃度達(dá)到109/毫升以上所形成。15
5. 如權(quán)利要求1所述的制作方法，其特征在于粉劑制劑的添加劑的載 劑、佐劑或稀釋劑至少包含木屑、黏土粉、接口活性分散展著劑。
6. 如權(quán)利要求5所述的制作方法，其特征在于含有枯草桿菌的粉劑制 20劑培養(yǎng)液經(jīng)由濃縮、噴霧干燥所形成的粉體，添加適量的黏土，使其孢子濃度達(dá)到109/公克以上所形成。
7. 如權(quán)利要求1所述的制作方法，其特征在于枯草桿菌的殺菌劑或土 壤改良劑可用于植物、土壤、種子的處理與青枯病的防治效果優(yōu)越。
全文摘要
本發(fā)明系為一種枯草桿菌的殺菌劑或土壤改良劑的制作方法，主要系利用淀粉、蛋白質(zhì)、糖蜜、酵母粉、玉米浸泡液(corn steep liquor)、(NH₄)₂SO₄、K₂HPO₄、MgSO₄·7H₂O、CaCl₂·2H₂O及MnSO₄·H₂O作為培養(yǎng)基，并經(jīng)由下列制作步驟菌種、培養(yǎng)基質(zhì)、發(fā)酵操作、真空濃縮、液劑制劑、噴霧干燥、粉劑制劑及其它制劑，其中方法所制作的培養(yǎng)液作為殺菌劑或土壤改良劑的用途，而培養(yǎng)液的殺菌劑或土壤改良劑，可分為液劑型產(chǎn)品或粉劑型產(chǎn)品，可用于植物、土壤、種子的處理與青枯病的防治效果優(yōu)越。
文檔編號A01N63/00GK101209057SQ20061016806
公開日2008年7月2日 申請日期2006年12月25日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月25日
發(fā)明者陳良榮 申請人:百泰生物科技股份有限公司