專(zhuān)利名稱(chēng)：雙斑東方鲀?nèi)扼w誘導(dǎo)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種魚(yú)類(lèi)三倍體的誘導(dǎo)，尤其是涉及一種采用靜水壓法誘導(dǎo)雙斑東方鲀?nèi)扼w的方法。
背景技術(shù)：
三倍體育種具有控制過(guò)度繁殖，促進(jìn)生長(zhǎng)、延長(zhǎng)壽命及改進(jìn)魚(yú)肉品質(zhì)等方面的優(yōu)點(diǎn)，是品種改良的重要技術(shù)之一，它包括冷休克、熱休克和靜水壓處理三種方法。目前有關(guān)成功誘導(dǎo)雙斑東方鲀?nèi)扼w的方法尚未見(jiàn)正式報(bào)道。其它魚(yú)類(lèi)三倍體的誘導(dǎo)多采用冷休克和熱休克兩種方法，迄今為止相關(guān)工作有1)Swarup對(duì)三棘刺魚(yú)卵采用冷休克方法誘導(dǎo)，得到三倍體成魚(yú)(Swarup H Productionof triploidy in Gasterosteus aculeatus(L)[J].JGenet，1959a，(56)129～142.)；2)Ojima等對(duì)鯉魚(yú)卵采用冷休克方法誘導(dǎo)，結(jié)果獲得了三倍體成魚(yú)(Ojima Y，MakinoS Triploidy induced by cold shock in fertilized eggs of the carp[M].Proc JapanAcad1978，54，ser B，359～362.)；3)Chourrout采用熱休克方法得到虹鱒魚(yú)三倍體幼魚(yú)(Chourrout D Thermal inductionof diploid gynogenesis and triploidy in the eggs of the rainbow trout(Salmon gairdner Richardson)[J].Reprod，Nutr Develop，1980，20(3A)727～733.)；4)Wolters等對(duì)斑點(diǎn)叉尾魚(yú)回進(jìn)行冷休克誘導(dǎo)三倍體，實(shí)驗(yàn)結(jié)果也獲得了三倍體成魚(yú)(Wolters W K，Libuy G S，Chrisman，C L.Induction of triploidy in channel catfish[J].Transs Am Fish，90C.1981a，110(2)310～312.)；5)龍鋒對(duì)黑鯛三倍體育種的研究，提出冷休克方法優(yōu)于熱休克(尤鋒.黑鯛三倍體的人工誘導(dǎo)研究[J].海洋與湖沼，1993，24(3)248～255.)；6)Peter F等熱休克誘導(dǎo)的溪鱒三倍體(Peter F，Galbreath Barbaral，Samples.Optimization of thermal shock protocols for induction of triploidy in brooktrout[J].North American journal of aquaculture，2000，62(4)249～259.)；7)王軍等的大黃魚(yú)三倍體誘導(dǎo)的初步研究(王軍，王德祥，尤穎哲，等，大黃魚(yú)三倍體誘導(dǎo)的初步研究[J]，廈門(mén)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2001，40(4)927-930)。
除此之外，利用溫度休克的方法還在鰈、大菱鲆、大西洋鮭和大馬哈魚(yú)等20余種魚(yú)類(lèi)獲得三倍體。靜水壓處理方法則是新近發(fā)展起來(lái)的一種誘導(dǎo)魚(yú)類(lèi)多倍體的方法，其原理是利用水靜壓機(jī)能夠產(chǎn)生較高的水靜壓來(lái)抑制第二極體的排出而產(chǎn)生三倍體。國(guó)外近幾年來(lái)采用靜水壓誘導(dǎo)三倍體較多，迄今為止，國(guó)內(nèi)外相關(guān)工作有①Linhart O等在歐洲鯰魚(yú)受精后3min以600kg/cm2的壓力持續(xù)4min，結(jié)果得到97.8％±1.8％三倍體胚胎，最后有33.7％±16.9％的存活率(Linhart O，et al.Comparison ofmethods for hatchery-scale triploidization of European catfish (Silurus glanisL)[J].Linhart O Journal of AppliedIchthyology，2001，17(6)247～255)；②林琪等的靜水壓休克誘導(dǎo)大黃魚(yú)三倍體(林琪，吳建紹，曾志南，靜水壓休克誘導(dǎo)大黃魚(yú)三倍體[J]，海洋科學(xué)，2001，25(9)6-9)；③桂建芳等采用靜水壓休克法研究促使第二極體保留誘發(fā)三倍體水晶彩鯽的最佳條件，結(jié)果產(chǎn)生了100％的三倍體水晶彩鯽，而且胚胎存活率為對(duì)照組的90％左右(桂建芳，梁紹昌，孫建民，等.魚(yú)類(lèi)染色體組操作的研究I.靜水壓休克誘導(dǎo)水晶彩鯽[J].水生生物學(xué)報(bào)，1990，14(4)336～344.)。
雖然靜水壓處理誘導(dǎo)魚(yú)類(lèi)三倍體的方法需要靜水壓儀這一特殊設(shè)備，但是靜水壓處理的三倍體在誘導(dǎo)率和存活率上都要高于溫度休克。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在提供一種結(jié)果純正，孵化率、誘導(dǎo)率和苗種成活率高，具有便于現(xiàn)場(chǎng)操作、安全可靠、簡(jiǎn)便易行等優(yōu)點(diǎn)的誘導(dǎo)雙斑東方鲀?nèi)扼w的方法。為此，本發(fā)明采用靜水壓法進(jìn)行誘導(dǎo)的技術(shù)方案。
本發(fā)明的步驟為1)采用人工受精，用家禽尾翅羽毛將成熟親魚(yú)擠出的精子與卵混合；2)在精子與卵混合后的受精卵中加入海水并攪拌，激活受精卵；3)將激活后的受精卵迅速放入壓力容器，于激活后30～60s開(kāi)始施壓，施壓達(dá)到靶壓力38～56MPa時(shí)停止施壓，水溫15～25℃，pH值7.5～8.5；持續(xù)5～20min后降壓，完成靜水壓法的三倍體誘導(dǎo)。
所用海水的水溫最好為19～21℃；pH值8.0～8.2；最好在達(dá)到靶壓力49～51MPa時(shí)停止施壓。
本發(fā)明采用靜水壓法進(jìn)行誘導(dǎo)的技術(shù)方案具有以下突出的優(yōu)點(diǎn)結(jié)果純正，孵化率、誘導(dǎo)率和苗種成活率高，便于現(xiàn)場(chǎng)操作、安全可靠、簡(jiǎn)便易行。
具體實(shí)施例方式
以下實(shí)施例將對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。
實(shí)施例1先將性成熟的雙斑東方鲀親魚(yú)進(jìn)行催產(chǎn)，采用干法受精，水溫為15～18℃，pH值7.5～7.8，將激活后的受精卵迅速置于壓力容器中，于激活30s后開(kāi)始施壓，當(dāng)靶壓力達(dá)到38～43Mpa時(shí)停止施壓，持續(xù)5min后降壓，即完成靜水壓法的誘導(dǎo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，孵化率＞90％，苗種成活率≥35％，三倍體誘導(dǎo)率≥30％。
實(shí)施例2與實(shí)施例1相似，其不同在于當(dāng)靶壓力達(dá)到43～49Mpa時(shí)停止施壓，施壓后持續(xù)10min后降壓，即完成靜水壓法的誘導(dǎo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，孵化率＞73％，苗種成活率≥22％，三倍體誘導(dǎo)率68％。
實(shí)施例3與實(shí)施例1相似，其不同在于當(dāng)靶壓力達(dá)到49～56Mpa時(shí)停止施壓，施壓后持續(xù)20min后降壓，即完成靜水壓法的誘導(dǎo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，孵化率＞40％，苗種成活率≥20％，三倍體誘導(dǎo)率83％。
實(shí)施例4先將性成熟的雙斑東方鲀親魚(yú)進(jìn)行催產(chǎn)，采用干法受精，水溫為18～21℃，pH值7.8～8.0，將激活后的受精卵迅速置于壓力容器中，于激活30s后開(kāi)始施壓，當(dāng)靶壓力達(dá)到38～43Mpa時(shí)停止施壓，持續(xù)20min后降壓，即完成靜水壓法的誘導(dǎo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，孵化率＞50％，苗種成活率≥78％，三倍體誘導(dǎo)率≥60％。
實(shí)施例5與實(shí)施例4相似，其不同在于激活35s后開(kāi)始施壓，當(dāng)靶壓力達(dá)到43～49Mpa時(shí)停止施壓，持續(xù)10min后降壓，即完成靜水壓法的誘導(dǎo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，孵化率＞56％，苗種成活率≥18％，三倍體誘導(dǎo)率75％。
實(shí)施例6與實(shí)施例4相似，其不同在于激活40s后開(kāi)始施壓，當(dāng)靶壓力達(dá)到49～56Mpa時(shí)停止施壓，持續(xù)5min后降壓，即完成靜水壓法的誘導(dǎo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，孵化率＞83％，苗種成活率＞28％，三倍體誘導(dǎo)率91％。
實(shí)施例7先將性成熟的雙斑東方鲀親魚(yú)進(jìn)行催產(chǎn)，采用干法受精，水溫為21～23℃，pH值8.0～8.5，將激活后的受精卵迅速置于壓力容器中，其不同在于激活50s后開(kāi)始施壓，當(dāng)靶壓力達(dá)到38～43Mpa時(shí)停止施壓，持續(xù)5min后降壓，即完成靜水壓法的誘導(dǎo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，孵化率＞73％，苗種成活率≥25％，三倍體誘導(dǎo)率62％。
實(shí)施例8與實(shí)施例7相似，其不同在于水溫為23～25℃，激活55s后開(kāi)始施壓，當(dāng)靶壓力達(dá)到43～49Mpa時(shí)停止施壓，持續(xù)10min后降壓，即完成靜水壓法的誘導(dǎo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，孵化率＞69％，苗種成活率≥20％，三倍體誘導(dǎo)率88％。
實(shí)施例9與實(shí)施例7相似，其不同在于激活60s后開(kāi)始施壓，當(dāng)靶壓力達(dá)到49～56Mpa時(shí)停止施壓，持續(xù)20min后降壓，即完成靜水壓法的誘導(dǎo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，孵化率＞21％，苗種成活率＞15％，三倍體誘導(dǎo)率85％。
實(shí)施例10先將性成熟的雙斑東方鲀親魚(yú)進(jìn)行催產(chǎn)，采用干法受精，水溫為20～21℃，pH值7.8～8.0，將激活后的受精卵迅速置于壓力容器中，于激活30s后開(kāi)始施壓，當(dāng)靶壓力達(dá)到38～41Mpa時(shí)停止施壓，持續(xù)5min后降壓，即完成靜水壓法的誘導(dǎo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，孵化率＞91％，苗種成活率≥45％，三倍體誘導(dǎo)率36％。
實(shí)施例11與實(shí)施例10相似，其不同在于持續(xù)10min后降壓，即完成靜水壓法的誘導(dǎo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，孵化率＞70％，苗種成活率≥26％，三倍體誘導(dǎo)率69％。
實(shí)施例12與實(shí)施例10相似，其不同在于持續(xù)20min后降壓，即完成靜水壓法的誘導(dǎo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，孵化率＞63％，苗種成活率≥50％，三倍體誘導(dǎo)率66％。
實(shí)施例13先將性成熟的雙斑東方鲀親魚(yú)進(jìn)行催產(chǎn)，采用干法受精，水溫為20～21℃，pH值7.8～8.0，將激活后的受精卵迅速置于壓力容器中，于激活60s后開(kāi)始施壓，當(dāng)靶壓力達(dá)到49～51Mpa時(shí)停止施壓，持續(xù)5min后降壓，即完成靜水壓法的誘導(dǎo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，孵化率＞73％，苗種成活率≥28％，三倍體誘導(dǎo)率100％。
實(shí)施例14
與實(shí)施例13相似，其不同在于施壓后持續(xù)10min后降壓，即完成靜水壓法的誘導(dǎo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，孵化率＞38％，苗種成活率≥15％，三倍體誘導(dǎo)率100％。
實(shí)施例15與實(shí)施例13相似，其不同在于施壓后持續(xù)20min后降壓，即完成靜水壓法的誘導(dǎo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，孵化率＞13％，苗種成活率＞10％，三倍體誘導(dǎo)率85％。
權(quán)利要求
1.雙斑東方鲀?nèi)扼w誘導(dǎo)方法，其特征在于其步驟為1)采用人工受精，用家禽尾翅羽毛將成熟親魚(yú)擠出的精子與卵混合；2)在精子與卵混合后的受精卵中加入海水并攪拌，激活受精卵；3)將激活后的受精卵迅速放入壓力容器，于激活后30～60s開(kāi)始施壓，施壓達(dá)到靶壓力38～56MPa時(shí)停止施壓，水溫15～25℃，pH值7.5～8.5；持續(xù)5～20min后降壓，完成靜水壓法的三倍體誘導(dǎo)。
2.如權(quán)利要求1所述的雙斑東方鲀?nèi)扼w誘導(dǎo)方法，其特征在于所述的水溫為19～21℃。
3.如權(quán)利要求1所述的雙斑東方鲀?nèi)扼w誘導(dǎo)方法，其特征在于所述的pH值8.0～8.2。
4.如權(quán)利要求1所述的雙斑東方鲀?nèi)扼w誘導(dǎo)方法，其特征在于所述的靶壓力為49～51MPa時(shí)停止施壓。
全文摘要
雙斑東方鲀?nèi)扼w誘導(dǎo)方法，涉及一種魚(yú)類(lèi)三倍體的誘導(dǎo)，尤其是涉及一種采用靜水壓法誘導(dǎo)雙斑東方鲀?nèi)扼w。提供一種結(jié)果純正，孵化率、誘導(dǎo)率和苗種成活率高，具有便于現(xiàn)場(chǎng)操作、安全可靠、簡(jiǎn)便易行等優(yōu)點(diǎn)的誘導(dǎo)雙斑東方鲀?nèi)扼w的方法。步驟為采用人工受精，用家禽尾翅羽毛將成熟親魚(yú)擠出的精子與卵混合；在精子與卵混合后的受精卵中加入海水并攪拌，激活受精卵；將激活后的受精卵迅速放入壓力容器，于激活后30～60s開(kāi)始施壓，施壓達(dá)到靶壓力38～56MPa時(shí)停止施壓，水溫15～25℃，pH值7.5～8.5；持續(xù)5～20min后降壓，完成靜水壓法的三倍體誘導(dǎo)。
文檔編號(hào)A01K61/00GK1836504SQ20061007697
公開(kāi)日2006年9月27日 申請(qǐng)日期2006年4月13日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月13日
發(fā)明者丁少雄, 尤穎哲, 蔡葆青, 陳何東 申請(qǐng)人:廈門(mén)大學(xué)