專利名稱：一種快速繁殖枳橙的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種快速繁殖枳橙的方法，尤其是涉及一種以嫁接植株為外植體及連續(xù)繼代增殖培養(yǎng)的方法。
背景技術(shù)：
枳橙[C.sinensis(L.)Osb×Poncirus trifoliate(L.)Rsf.]為甜橙與枳的雜種，是世界各柑橘生產(chǎn)國(guó)廣泛應(yīng)用的砧木，生長(zhǎng)勢(shì)比枳殼強(qiáng)，繼承了枳殼抗腳腐病、抗衰退病的特性，并具有耐旱、耐寒、耐貧瘠，對(duì)土壤適應(yīng)性廣、與大多數(shù)商用品種親和力強(qiáng)等特征。
在柑橘離體培養(yǎng)快速繁殖方面，目前多數(shù)利用實(shí)生苗胚軸、子葉培養(yǎng)，儀有少數(shù)采自嫁接樹莖尖或莖段為外植體，這主要是因?yàn)椋康姆只|(zhì)量差，分化系數(shù)低，培養(yǎng)過程中容易產(chǎn)生愈傷組織，特別是在芽的增殖培養(yǎng)過程中產(chǎn)生愈傷組織成苗，往往產(chǎn)生性狀變異，出現(xiàn)良種種性不穩(wěn)定的問題，達(dá)不到工廠化繁育柑橘苗木的技術(shù)要求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種芽的分化質(zhì)量好，分化系數(shù)高，良種種性穩(wěn)定的以嫁接植株為外植體及連續(xù)繼代增殖培養(yǎng)的枳橙組織培養(yǎng)快速繁殖方法。
本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。
其包括如下步驟(1)嫁接植株帶節(jié)莖段外植體芽的誘導(dǎo)萌發(fā) 誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為MS+BA 0.5～1.5mg·L-1(優(yōu)選方案為MS+BA 1mg·L-1)；(2)芽的增殖繼代培養(yǎng) 使用培養(yǎng)基MS+BA 0.2～1mg·L-1+NAA0.01～0.1mg·L-1(優(yōu)選方案為MS+BA 0.5mg·L-1+NAA 0.05mg·L-1)連續(xù)繼代增殖培養(yǎng)；(3)生根培養(yǎng)與移栽 以1/2MS+NAA 0.2～0.8mg·L-1+0.2％活性炭(優(yōu)選方案為1/2MS+NAA 0.5 mg·L-1+0.2％活性炭)培養(yǎng)基誘導(dǎo)增殖芽生根，培養(yǎng)溫度24±2℃，每天連續(xù)光照10-14小時(shí)，光照強(qiáng)度為1000～1500lx；培養(yǎng)20～35天后，取出試管苗移栽，移栽基質(zhì)配方為白砂土∶草炭＝1∶0.8～1.2或者白砂土∶發(fā)酵棉籽殼＝1∶0.8-1.2(優(yōu)選方案為白砂土∶草炭或發(fā)酵棉籽殼＝1∶1)。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是枳橙嫁接樹莖段外植體誘導(dǎo)芽質(zhì)量好，芽能在增殖培養(yǎng)基連續(xù)多代增殖，再生植株無變異，繁殖系數(shù)可達(dá)3以上，達(dá)到工廠化繁育柑橘苗木的技術(shù)要求。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述。
實(shí)施例1(1)外植體芽的誘導(dǎo)萌發(fā) 取帶芽單節(jié)莖段作外植體誘導(dǎo)芽的萌發(fā)，枝條去葉、刺后，剪成5cm長(zhǎng)的莖段，自來水沖洗60min，在超凈工作臺(tái)上用70％酒精表面消毒1min，再用0.1％的升汞溶液消毒12min，倒去升汞溶液，無菌水沖洗3～4次；將經(jīng)過處理的莖段置于超凈工作臺(tái)上，用解剖刀切成1.5cm長(zhǎng)的單節(jié)帶芽莖段，然后芽眼朝上，平放于培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)；培養(yǎng)基配方為MS+BA1mg·L-1，培養(yǎng)溫度24±2℃，每天連續(xù)光照12小時(shí)，光照強(qiáng)度為1200lx。接種7天后芽全部萌發(fā)，嫩芽整齊、健壯，生長(zhǎng)速度快，15天可達(dá)1.5～2cm高。
(2)芽的增殖繼代培養(yǎng) 當(dāng)芽萌發(fā)一個(gè)星期后，將嫩芽從基部切下，轉(zhuǎn)入芽增殖培養(yǎng)基(MS+BA 0.5mg·L-1+NAA 0.05mg·L-1)進(jìn)行增殖培養(yǎng)；待形成叢芽后，分離成單芽，部分單芽繼續(xù)增殖；在增殖繼代培養(yǎng)條件下，接種芽基部產(chǎn)生大量叢芽，芽梢長(zhǎng)勢(shì)好，生長(zhǎng)快，葉色濃綠，葉片舒展，有效新梢多，一個(gè)月即可繼代一次，平均月增殖系數(shù)3.36。
(3)生根培養(yǎng)與移栽 從增殖培養(yǎng)的嫩芽中選取生長(zhǎng)健壯的芽梢，接種到生根培養(yǎng)基(1/2MS+NAA 0.5mg·L-1+0.2％活性炭)進(jìn)行生根培養(yǎng)；生根率能達(dá)到95～100％；培養(yǎng)30天后，取出試管苗，洗凈培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)入裝有白砂土與草炭(1∶1)的培養(yǎng)缽中，用塑料薄膜覆蓋，在溫室煉苗，成活率在90％以上；一個(gè)月后去膜，繼續(xù)在溫室中生長(zhǎng)。
實(shí)施例2(1)外植體芽的誘導(dǎo)萌發(fā)誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為MS+BA 0.5mg·L-1，其它條件同實(shí)施例1，接種10天后芽全部萌發(fā)，20天可達(dá)1.5～2cm高；(2)芽的增殖繼代培養(yǎng) 繼代培養(yǎng)基為MS+BA 0.5mg·L-1+NAA 0.02mg·L-1，芽月增殖系數(shù)2.86；(3)生根培養(yǎng)與移栽從增殖培養(yǎng)的嫩芽中選取生長(zhǎng)健壯的芽梢，接種到生根培養(yǎng)基(1/2MS+NAA 0.5mg·L-1+0.2％活性炭)進(jìn)行生根培養(yǎng)；生根率能達(dá)到95％；培養(yǎng)25天后，取出試管苗，洗凈培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)入裝有白砂土與發(fā)酵棉籽殼(1∶1)的培養(yǎng)缽中，用塑料薄膜覆蓋，在溫室煉苗，成活率92％。
實(shí)施例3外植體芽的誘導(dǎo)萌發(fā)、芽的增殖繼代培養(yǎng)同實(shí)施例1，生根培養(yǎng)基改為1/2MS+NAA0.2mg·L-1+0.2％活性炭，生根率為63％，培養(yǎng)30天后，取出試管苗，洗凈培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)入裝有白砂土與發(fā)酵棉籽殼(1∶1)的培養(yǎng)缽中，用塑料薄膜覆蓋，在溫室煉苗，成活率85％。
權(quán)利要求
1.一種快速繁殖枳橙的方法，包括如下步驟(1)嫁接植株帶節(jié)莖段外植體芽的誘導(dǎo)萌發(fā)誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為MS+BA 0.5～1.5mg·L-1；(2)芽的增殖繼代培養(yǎng) 使用培養(yǎng)基MS+BA 0.2～1mg·L-1+NAA 0.01～0.1mg·L-1連續(xù)繼代增殖培養(yǎng)；(3)生根培養(yǎng)與移栽 以1/2MS+NAA 0.2～0.8mg·L-1+0.2％活性炭培養(yǎng)基誘導(dǎo)增殖芽生根，培養(yǎng)溫度24±2℃，每天連續(xù)光照10-14小時(shí)，光照強(qiáng)度為1000～1500lx；培養(yǎng)20～35天后，取出試管苗移栽，移栽基質(zhì)配方為白砂土∶草炭或發(fā)酵棉籽殼＝1∶0.8-1.2。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速繁殖枳橙的方法，其特征在于，所述芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為MS+BA 1.0mg·L-1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的快速繁殖枳橙的方法，其特征在于，所述芽的增殖繼代培養(yǎng)基配方為MS+BA 0.5mg·L-1+NAA 0.05mg·L-1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的快速繁殖枳橙的方法，其特征在于，所述生根培養(yǎng)基配方為1/2MS+NAA 0.5mg·L-1+0.2％活性炭。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的快速繁殖枳橙的方法，其特征在于，所述生根培養(yǎng)基配方為1/2MS+NAA 0.5mg·L-1+0.2％活性炭。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的快速繁殖枳橙的方法，其特征在于，所述移栽基質(zhì)配方為白砂土∶草炭或發(fā)酵棉籽殼＝1∶1。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的快速繁殖枳橙的方法，其特征在于，所述移栽基質(zhì)配方為白砂土∶草炭或發(fā)酵棉籽殼＝1∶1。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的快速繁殖枳橙的方法，其特征在于，所述移栽基質(zhì)配方為白砂土∶草炭或發(fā)酵棉籽殼＝1∶1。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種快速繁殖枳橙的方法，其包括如下步驟(1)嫁接植株帶節(jié)莖段外植體芽的誘導(dǎo)萌發(fā)誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為MS+BA 0.5～1.5mg·L
文檔編號(hào)A01H4/00GK1709044SQ20051003183
公開日2005年12月21日 申請(qǐng)日期2005年7月8日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月8日
發(fā)明者鄧子牛, 胡春華 申請(qǐng)人:鄧子牛, 胡春華