專利名稱：小榕離體快速繁殖的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)方法，特別是一種用固體培養(yǎng)以提高小榕繁殖速度的方法。
我國隨著改革開放，經(jīng)濟(jì)迅速發(fā)展，人們的生活水平提高，在北京、上海、廣州和深圳等地已時(shí)興觀賞水草熱，在玻璃水箱中種植各種形態(tài)優(yōu)美的水草，配上色彩斑斕的熱帶魚游弋其中，把室內(nèi)環(huán)境布置得更加清新幽雅、富麗堂皇。
小榕(Anubias barteri nana)是屬于水榕類的觀賞性小型水草，原產(chǎn)西非，株高最多只有10cm，葉片呈深綠色，卵形。水榕是非洲熱帶水域的特色水草，用水榕類水草來造景，能反映出熱帶水域的景觀。小榕是水榕的一種，我國目前的需求主要是由臺灣、日本和新加坡等地引進(jìn)，常規(guī)繁殖方式主要是以根莖長出的側(cè)枝繁殖，繁殖系數(shù)低，且受環(huán)境和季節(jié)制約，不能滿足市場需求。采用植物組織培養(yǎng)方法繁殖小榕是獲得大量優(yōu)質(zhì)商品苗的方法之一，目前在國內(nèi)還未見到有關(guān)小榕離體快速繁殖方法的報(bào)道。
本發(fā)明的目的就是提供一種操作簡便、繁殖速度快的小榕離體繁殖的方法。
本發(fā)明可以由以下方式來實(shí)現(xiàn)以小榕的腋芽作外植體，誘導(dǎo)產(chǎn)生叢生芽，將其切成單芽，接種在固體培養(yǎng)基中作繼代培養(yǎng)，獲得大量的叢生芽，將幼芽轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，得到大量健壯的完整植株并出瓶移栽。首先，誘導(dǎo)小榕潛伏芽萌發(fā)作外植體，將切去頂芽的成品苗半浸泡狀放置于以MS基本培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，由配制1L培養(yǎng)基大量元素用量是原來MS的1/10～1/5、微量元素和鐵鹽用量是原來MS用量的1/5～1/2和含0.1～0.5mg/L6-BA組成的營養(yǎng)液中，20天后，幾乎每個(gè)葉腋下的潛伏芽均長成幼芽，將芽切下按常規(guī)消毒方式處理后，獲得無菌材料作外植體；其次，外植體接種在MS+6-BA1.0mg/L+IAA0.3mg/L(以下單位相同，省略)、瓊脂0.75％、白糖3％、PH5.8的培養(yǎng)基上作初始培養(yǎng)，誘導(dǎo)產(chǎn)生叢生芽；再者，將叢生芽切成單芽，接種在1/3MS+6-BA2.0mg/L+IAA0.2mg/L、瓊脂0.75％、白糖3％、PH5.8的培養(yǎng)基中作繼代培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度23～27℃，光照12hd-1，光照度1500Lux，產(chǎn)生大量叢生芽和生根植株；第四，將幼芽轉(zhuǎn)入MS+IAA0.4、瓊脂0.75％、白糖3％、PH5.8的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根，培養(yǎng)溫度23～27℃，光照12hd-1，光照度1500Lux，培養(yǎng)時(shí)間為20天；最后，將植株種植在以細(xì)砂作基質(zhì)并加有淹沒砂面的凈水的盆中作過渡培養(yǎng)，1個(gè)月后可種植在淤泥中作進(jìn)一步培養(yǎng)。1/3MS是指配制1L培養(yǎng)基以MS基本培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，大量元素用量是原來MS用量的1/3，微量元素、鐵鹽和有機(jī)物(肌醇用量不變)用量是原來MS用量的1/2。
本發(fā)明通過固體培養(yǎng)方法，既提高了幼芽繁殖系數(shù)，縮短了培養(yǎng)時(shí)間，又保證了植株的質(zhì)量，為加快小榕優(yōu)質(zhì)苗繁殖速度提供了新的途徑。
下面結(jié)合實(shí)施例，對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
實(shí)施例一1、誘導(dǎo)小榕潛伏芽的萌發(fā)作外植體本發(fā)明采用小榕的腋芽作外植體。由于自然條件下其腋芽呈休眠狀，因此，本發(fā)明中將切去頂芽的成品苗半浸泡狀放置于以MS基本培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，由配制1L培養(yǎng)基大量元素用量是原來MS的1/6、微量元素和鐵鹽用量是原來MS用量的1/2和含0.3mg/L6-BA組成的營養(yǎng)液中，20天后，幾乎每個(gè)葉腋下的潛伏芽均長成約0.2cm高、具有1～2片葉的芽。將腋芽切下，首先用加有少量洗衣粉的自來水沖洗5min，再用清水沖洗干凈，然后在無菌條件下，用75％酒精消毒15s，0.1％升汞浸泡8min，最后用無菌水沖洗4～5次，獲得無菌材料作外植體。
2、初始培養(yǎng)將獲得的腋芽外植體接種在MS+6-BA1.0mg/L+IAA0.3mg/L、瓊脂0.75％、白糖3％、PH5.8的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)溫度23～27℃，光照12hd-1，光照度1500Lux，培養(yǎng)40天后，腋芽基部產(chǎn)生了愈傷組織塊，上面還長有幼芽，誘導(dǎo)率達(dá)80％左右。
3、繼代培養(yǎng)將叢生芽切成單芽，接種在1/3MS+6-BA2.0mg/L+IAA40.2mg/L、瓊脂0.75％、白糖3％、PH5.8的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)溫度23～27℃，光照12hd-1，光照度1500Lux，培養(yǎng)周期為60天，其結(jié)果見表一。1/3MS是指配制1L培養(yǎng)基，以MS基本培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，大量元素用量是原來MS用量的1/3，微量元素、鐵鹽和有機(jī)物(肌醇用量不變)用量是原來MS用量的1/2。表一
繁殖系數(shù)=出芽數(shù)/接種數(shù)4、生根培養(yǎng)將高1.0cm具有2片葉的芽轉(zhuǎn)入MS+IAA0.4mg/L、瓊脂0.75％、白糖2％、PH5.8的培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，其結(jié)果見表二。表二
生根率=生根數(shù)/接種數(shù)×100％5、出瓶移栽幼苗出瓶移栽前煉苗3天，取出后洗凈根部培養(yǎng)基，然后種植在以細(xì)砂作基質(zhì)并加有淹沒砂面的凈水的盆中，在常溫陰涼條件下作過渡培養(yǎng)，1個(gè)月后成活率達(dá)90％以上，可種植在淤泥中作進(jìn)一步培養(yǎng)。
從以上試驗(yàn)結(jié)果表明，采用固體培養(yǎng)基1/3MS+6-BA2.0mg/L+IAA0.2mg/L繁殖小榕幼苗，培養(yǎng)周期為60天，繁殖系數(shù)是4.04，若作連續(xù)培養(yǎng)，1年可培養(yǎng)6代，則由1個(gè)芽可產(chǎn)生新芽4348個(gè)；而采用傳統(tǒng)分枝繁殖方法，1年只能繁殖10株左右。與傳統(tǒng)方法相比較，本發(fā)明采用固體培養(yǎng)方法，大大提高了小榕繁殖速度，且能在短時(shí)間內(nèi)獲得成批優(yōu)質(zhì)苗。
權(quán)利要求
1.一種小榕離體快速繁殖的方法，其特征在于以小榕的腋芽為外植體，誘導(dǎo)產(chǎn)生叢生芽，將其切成單芽，接種在固體培養(yǎng)基中作繼代培養(yǎng)，獲得大量的叢生芽，將幼芽轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，得到大量健壯的完整植株并出瓶移栽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小榕離體快速繁殖的方法，其特征在于誘導(dǎo)小榕潛伏芽萌發(fā)作外植體，將切去頂芽的小榕成品苗半浸泡狀放置于以MS基本培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，配制1L培養(yǎng)基大量元素用量是原來MS用量的1/10～1/5，微量元素和鐵鹽用量是原來MS用量的1/5～1/2和含0.1～0.5mg/L6-BA組成的營養(yǎng)液中，20天后，幾乎每個(gè)葉腋下的潛伏芽均長成幼芽，將芽切下按常規(guī)消毒方式處理后，獲得無菌材料作外植體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小榕離體快速繁殖的方法，其特征在于外植體在MS+6-BA1.0mg/L+IAA0.3mg/L、瓊脂0.75％、白糖3％、PH5.8的培養(yǎng)基上作初始培養(yǎng)，誘導(dǎo)產(chǎn)生叢生芽，培養(yǎng)溫度23～27℃，光照12h·d-1，光照度1500Lux。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小榕離體快速繁殖的方法，其特征在于將叢生芽切成單芽，接種在1/3MS+6-BA2.0mg/L+IAA0.2mg/L、瓊脂0.75％、白糖3％、PH5.8的培養(yǎng)基上作繼代培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度23～27℃，光照12hd-1，光照度1500Lux，培養(yǎng)60天后，產(chǎn)生大量的叢生芽。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小榕離體快速繁殖的方法，其特征在于通過固體培養(yǎng)獲得的幼芽，轉(zhuǎn)入MS+IAA0.4mg/L、瓊脂0.75％、白糖2％、PH5.8的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根，培養(yǎng)溫度23～27℃，光照12hd-1，光照度1500Lux，培養(yǎng)時(shí)間為20天，得到完整植株。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小榕離體快速繁殖的方法，其特征在于將植株種植在以細(xì)砂作基質(zhì)并加有淹沒砂面的凈水的盆中作過渡培養(yǎng)，1個(gè)月后可種植在淤泥中作進(jìn)一步培養(yǎng)。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的小榕離體快速繁殖的方法，其特征在于1/3MS是指配制1L培養(yǎng)基以MS基本培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，大量元素用量是原來MS用量的1/3，微量元素、鐵鹽和有機(jī)物(肌醇用量不變)用量是原來MS用量的1/2。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種小榕離體快速繁殖的方法,其技術(shù)要點(diǎn)是以小榕的腋芽作外植體,誘導(dǎo)產(chǎn)生叢生芽,將其切成單芽,接種在固體培養(yǎng)基中作繼代培養(yǎng),獲得大量的叢生芽,將幼芽轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根,得到大量健壯的完整植株并出瓶移栽。本發(fā)明通過固體培養(yǎng)方法,既提高了幼芽繁殖系數(shù),縮短了培養(yǎng)時(shí)間,又保證了植株的質(zhì)量,為加快小榕優(yōu)質(zhì)苗繁殖速度提供了新的途徑。
文檔編號A01H4/00GK1319327SQ0110761
公開日2001年10月31日 申請日期2001年2月27日 優(yōu)先權(quán)日2001年2月27日
發(fā)明者饒秋容, 古志淵, 侯嵩生 申請人:梅縣梅雁生物工程研究所