一種防治煙草花葉病毒煙草花葉爾滅的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種防治煙草花葉病毒煙草花葉爾滅的制備方法。其菌種組分為：光合菌5％、黑曲霉2％、細黃鏈霉菌3％、淡紫擬青霉2％、枯草芽孢桿菌15％、膠質(zhì)芽孢桿菌15％、巨大芽孢桿菌15％、多粘芽孢桿菌10％、地衣芽孢桿菌10％、綠僵菌3％、蠟狀芽孢桿菌15％、側(cè)孢短芽孢桿菌5％；其制備方法為：先進行微生物試管斜面種子培養(yǎng)和微生物液體種子培養(yǎng)；再將液體種子接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，通過液體發(fā)酵，獲得大量的菌體及其代謝物即液體菌劑。由于本發(fā)明選用多種有益菌組合，采用科學培養(yǎng)、復(fù)配及同罐復(fù)合發(fā)酵工藝，因而具有原料成本低，生產(chǎn)工藝先進，菌劑質(zhì)量高、防治效果好等優(yōu)點。
【專利說明】
一種防治煙草花葉病毒煙草花葉爾滅的制備方法
[0001]技術(shù)領(lǐng)域:本發(fā)明屬生物農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及主要用于防治煙草、番茄、瓜類等多種作物的花葉病毒病的一種防治煙草花葉病毒煙草花葉爾滅的生物菌劑的制備方法。
[0002]【背景技術(shù)】:煙草花葉病在河南乃至全國大多數(shù)煙區(qū)發(fā)生較為普遍且日益嚴重，流行年份田間發(fā)病率能達到50%以上。煙草花葉病不僅影響煙草生長發(fā)育、降低煙葉產(chǎn)量，而且嚴重煙葉的外觀質(zhì)量和內(nèi)在品質(zhì)，降低煙農(nóng)的經(jīng)濟效益，使煙葉的可利用性變差，已成為煙草生產(chǎn)的重大阻礙因素。預(yù)防和防治花葉病一直是煙草生產(chǎn)中的重大課題。對煙草花葉病的防治，國內(nèi)外已做了大量研究，但目前，市場上推廣的防治煙草花葉病的農(nóng)藥的防效均不甚理想。
[0003]由于植物病毒特殊的胞內(nèi)寄生性，使病毒自身的增殖與寄主的代謝融為一體;加之植物缺乏完整的免疫系統(tǒng)，病毒一旦侵染植物，就可在植物細胞內(nèi)無期限存活，直至寄主死亡。此外，植物病毒種類多，傳播種類廣以及存在轉(zhuǎn)化成新型病毒和整合到寄主基因組的風險，也加大了植物病毒防治的難度。目前，除了免疫品種外，在植物病毒病的藥劑防治上，國內(nèi)外已經(jīng)進行了多年的研究，雖然一些抗病毒藥劑已經(jīng)開始進入實用化階段，但化學合成的藥劑具有周期長、成本高、毒性大、環(huán)境污染嚴重等特點，遠遠不能滿足農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的要求。而且長期連續(xù)高劑量地施用單一的農(nóng)藥制劑，容易造成農(nóng)藥的殘留、環(huán)境污染以及耐藥性發(fā)展等問題。
[0004]在防治煙草普通花葉病的生產(chǎn)應(yīng)用中，煙農(nóng)把煙草花葉病稱為“煙癌”，常用抗生素藥物化學防治，防治效果比較差，同時造成二次污染。目前國內(nèi)大多數(shù)復(fù)合菌產(chǎn)品都是單菌培養(yǎng)，最終再混合在一起的勾兌混合菌產(chǎn)品，對于混合菌施入土壤后的共生、互生情況，了解的不夠，或者經(jīng)混合后的“復(fù)合菌”本身就拮抗，所以造成防治效果差或者施入土壤后的“復(fù)合菌”之間相互拮抗，互相殘殺，造成根系有益菌減少，防效降低。
[0005]
【發(fā)明內(nèi)容】
:本發(fā)明的目的正是針對上述現(xiàn)有技術(shù)所存在問題而提供發(fā)明目的在于提供一種采用國內(nèi)外先進的液體深層發(fā)酵技術(shù)，科學配方，博采眾長，非常巧妙地將以上十二種有益微生物混菌同罐發(fā)酵復(fù)合培養(yǎng)，使他們互不拮抗，互生或共存，在發(fā)酵罐中和諧生長，混合菌系中微生物之間協(xié)同或抑制，提高煙株的抗病能力、達到防治煙草普通花葉病良好效果的一種防治煙草花葉病毒煙草花葉爾滅的生物菌劑的制備方法。
[0006]本發(fā)明為實現(xiàn)上述目的所采取的技術(shù)方案是:一種防治煙草花葉病毒煙草花葉爾滅的生物菌劑的制備方法。的菌種組分為:光合菌5 %、黑曲霉2 %、細黃鏈霉菌3 %、淡紫擬青霉2 %、枯草芽孢桿菌15%、膠質(zhì)芽孢桿菌15 %、巨大芽孢桿菌15 %、多粘芽孢桿菌10 %、地衣芽孢桿菌10%、綠僵菌3 %、蠟狀芽孢桿菌15 %、側(cè)孢短芽孢桿菌5 % ;其制備方法為:先進行微生物試管斜面種子培養(yǎng)和微生物液體種子培養(yǎng);再將液體種子接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，通過液體發(fā)酵，獲得大量的菌體及其代謝物即液體菌劑。
[0007]本發(fā)明的有益效果是:由于采用國內(nèi)外先進的液體深層發(fā)酵技術(shù)，科學配方，博采眾長，配方獨特，非常巧妙地將以上十二種有益微生物混菌同罐發(fā)酵復(fù)合培養(yǎng)，使他們互不拮抗，互生或共存，在發(fā)酵罐中和諧生長。施入土壤后，成為優(yōu)勢菌群，協(xié)同抗“敵”，對煙株和土壤無毒無害，防效明顯，防治效果達85%以上。共同享用一種復(fù)合培養(yǎng)基，從而降低生產(chǎn)成本，與同行業(yè)的產(chǎn)品相比，節(jié)約十倍以上的成本，且綠色環(huán)保。
[0008]由于利用有益微生物的生長繁殖和生命活動中產(chǎn)生的多種酶系和抗生物質(zhì)，在煙草根際土壤及植株葉片微生態(tài)系統(tǒng)形成優(yōu)勢種群，限制了其它病原微生物的繁殖機會，同時可誘導(dǎo)植物的過氧化酶，多酚氧化酶，葡聚糖酶等參與煙草植株對有害微生物的防御反應(yīng)，增強煙草的自身免疫力，并對煙草“普通花葉病”病毒有較好的抗性。另一方面，“煙草花葉爾滅”菌劑施入土壤后，迅速繁殖，成為優(yōu)勢菌群;控制了煙草根際的營養(yǎng)和其它資源，致使病原微生物在相當程度上喪失生存空間和條件，使煙草有關(guān)組織、細胞壁增厚、纖維化、木質(zhì)化程度提高，并在表皮層外形成角質(zhì)的雙層硅層，形成一道阻止煙草花葉病毒侵襲的屏障，并使煙草花葉病菌失去活性和生存空間、阻止煙草普通花葉病病毒“核酸和蛋白質(zhì)”的重組，從而提高煙株的抗病能力，達到防治煙草普通花葉病良好效果。本菌劑含有豐富的有機碳源、氮源、磷源和微生物在生命活動中產(chǎn)生的氨基酸、活性肽、生長素、赤霉素、吲哚乙酸、多種維生素等，同時產(chǎn)生調(diào)節(jié)刺激植物生長的活性物質(zhì)，煙草吸收后，結(jié)合自身的碳源、氮源促進光合代謝、植株通過自我調(diào)節(jié)而健壯，提高煙株抗逆能力和抗旱能力。
[0009]本發(fā)明的菌種來源簡要說明:
[0010]本發(fā)明所采用的菌種，均購買于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，并于2015年01月09日和中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心簽訂了微生物遺傳資源提供利用協(xié)議書(CGMCC/2007/4.00附錄I)及數(shù)據(jù)利用協(xié)議(CGMCC/2007/4.00附錄2) ο
[0011]【具體實施方式】:實施例1:一種防治煙草花葉病毒煙草花葉爾滅的制備方法的菌種組分為:光合菌5%、黑曲霉2%、細黃鏈霉菌3%、淡紫擬青霉2%、枯草芽孢桿菌15%、膠質(zhì)芽孢桿菌15%、巨大芽孢桿菌15%、多粘芽孢桿菌10%、地衣芽孢桿菌10%、綠僵菌3%、蠟狀芽孢桿菌15 %、側(cè)孢短芽孢桿菌5 其制備方法為:先進行微生物試管斜面種子培養(yǎng)和微生物液體種子培養(yǎng);再將液體種子接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，通過液體發(fā)酵，獲得大量的菌體及其代謝物即液體菌劑。
[0012]實施例2:所述一種防治煙草花葉病毒煙草花葉爾滅的制備方法為:①斜面培養(yǎng):將上述原始菌種在無菌條件下分別接種于對應(yīng)的培養(yǎng)基上活化，使用的斜面培養(yǎng)基為培養(yǎng)黑曲霉、綠僵菌、淡紫擬青霉的PDA-葡萄糖培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度設(shè)定在28°C條件下培養(yǎng)4天、培養(yǎng)枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、側(cè)孢短芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、膠質(zhì)芽孢桿菌、多粘芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、側(cè)孢短芽孢桿菌的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度設(shè)在30°C培養(yǎng)3天、培養(yǎng)細黃鏈霉菌的高氏一號培養(yǎng)基控制培養(yǎng)溫度30°C培養(yǎng)5天，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基加10g/L葡萄糖培養(yǎng)光合細菌溫度設(shè)在34°C培養(yǎng)3天；
[0013]②種子培養(yǎng):將斜面培養(yǎng)的菌種在無菌條件下分別接種于液體擴增培養(yǎng)基中，液體擴增培養(yǎng)基有培養(yǎng)黑曲霉、綠僵菌、淡紫擬青霉的PDA-葡萄糖培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度設(shè)定在28°C條件下150r/min搖床中培養(yǎng)2天，培養(yǎng)細黃鏈霉菌的高氏一號培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度設(shè)定在30°C條件下150r/min搖床中培養(yǎng)2天，培養(yǎng)枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、側(cè)孢短芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、膠質(zhì)芽孢桿菌、多粘芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、側(cè)孢短芽孢桿菌的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度設(shè)在30°C條件下150r/min搖床中培養(yǎng)I天，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基加10g/L葡萄糖培養(yǎng)光合細菌溫度設(shè)在34°C條件下150r/min搖床中培養(yǎng)I天；
[0014]③發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng):采用液體混菌發(fā)酵培養(yǎng)，按配比制備的搖床種子按5-10%接入發(fā)酵培養(yǎng)基中混菌培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)基配比為:紅糖0.6%,葡萄糖0.3%,玉米淀粉1.8%,豆柏粉1.5 %、硫酸鎂0.03%,尿素0.12%、磷酸二氫鉀0.04 %、蛋白胨0.1 %、酵母粉
0.05%、碳酸鈉調(diào)節(jié)pH7.0、微量元素液5mL；培養(yǎng)條件:接種量5_10%，培養(yǎng)溫度控制30°C，轉(zhuǎn)速150-200r/min，通氣量1:0.5-0.8，發(fā)酵培養(yǎng)18-30小時，經(jīng)檢測有效活菌數(shù)120億/mlSP為液體菌劑。
[0015]實施例3:所述的一種防治煙草花葉病毒煙草花葉爾滅制備方法為:
[0016]①斜面培養(yǎng):將上述原始菌種在無菌條件下分別接種于對應(yīng)的培養(yǎng)基上活化，使用的斜面培養(yǎng)基為培養(yǎng)黑曲霉、綠僵菌、淡紫擬青霉的TOA-葡萄糖培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度設(shè)定在28°C條件下培養(yǎng)4天、培養(yǎng)枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、側(cè)孢短芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、膠質(zhì)芽孢桿菌、多粘芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、側(cè)孢短芽孢桿菌的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基設(shè)定在28°C條件下培養(yǎng)4天、培養(yǎng)枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、側(cè)孢短芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、膠質(zhì)芽孢桿菌、多粘芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、側(cè)孢短芽孢桿菌的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度設(shè)在30°C培養(yǎng)3天、培養(yǎng)細黃鏈霉菌的高氏一號培養(yǎng)基控制培養(yǎng)溫度30°C培養(yǎng)5天，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基加10g/L葡萄糖培養(yǎng)光合細菌溫度設(shè)在34°C培養(yǎng)3天；
[0017]②種子培養(yǎng):將斜面培養(yǎng)的菌種在無菌條件下分別接種于液體擴增培養(yǎng)基中，液體擴增培養(yǎng)基有培養(yǎng)黑曲霉、綠僵菌、淡紫擬青霉的PDA-葡萄糖培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度設(shè)定在28°C條件下150r/min搖床中培養(yǎng)2天，培養(yǎng)細黃鏈霉菌的高氏一號培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度設(shè)定在30°C條件下150r/min搖床中培養(yǎng)2天，培養(yǎng)枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、側(cè)孢短芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、膠質(zhì)芽孢桿菌、多粘芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、側(cè)孢短芽孢桿菌的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度設(shè)在30°C條件下150r/min搖床中培養(yǎng)I天，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基加10g/L葡萄糖培養(yǎng)光合細菌溫度設(shè)在30°C條件下180r/min搖床中培養(yǎng)I天。
[0018]種子液按體積比配置比:光合菌5% ;黑曲霉2% ;細黃鏈霉菌3% ;淡紫擬青霉2% ;枯草芽孢桿菌15% ;膠質(zhì)芽孢桿菌15% ;巨大芽孢桿菌15% ;多粘芽孢桿菌10% ;地衣芽孢桿菌10% ;綠僵菌3% ;蠟狀芽孢桿菌15% ;側(cè)孢短芽孢桿菌5%。
[0019]③發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng):把培養(yǎng)好的液體種子在無菌條件下接到經(jīng)高壓滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為5 % ο發(fā)酵培養(yǎng)基組成:紅糖0.6%；葡萄糖0.3%；玉米淀粉1.8%；豆柏粉1.5%；硫酸鎂0.03 % ;尿素0.12%;磷酸二氫鉀0.04 % ;蛋白胨0.1 % ;酵母粉0.05 % ;碳酸鈉調(diào)節(jié)PH7.0。微量元素液:5mL。培養(yǎng)條件:培養(yǎng)溫度控制在30°C，轉(zhuǎn)速180r/min，通氣量I:
0.5，發(fā)酵培養(yǎng)28小時經(jīng)檢測有效活菌數(shù)110億/ml即為煙草花葉爾滅的液體菌劑。
[0020]實施例4:所述一種防治煙草花葉病毒煙草花葉爾滅的制備方法的微生物菌體發(fā)酵制備好以后作為液體菌劑直接使用。
[0021]所述一種防治煙草花葉病毒煙草花葉爾滅的制備方法的生物菌劑含量和發(fā)酵液的液體菌劑含量2 100億/ml。
[0022]實施例5:所述一種防治煙草花葉病毒煙草花葉爾滅的制備方法的田間效果試驗為:
[0023]1、材料和方法
[0024]①參試品種為云煙87
[0025]②試驗地點基本情況
[0026]試驗在社旗縣苗店鎮(zhèn)進行，年日照總時數(shù)平均為2003.8小時，年平均氣溫14.8°C。全年無霜期226天，年平均降水量838.1lmm, 土壤類型為黃褐土，肥力中等，有灌溉條件。
[0027]③試驗設(shè)計
[0028]試驗設(shè)3個處理，3次重復(fù)，隨機區(qū)組排列，共9個小區(qū)，小區(qū)面積0.2畝，各小區(qū)留2行保護行，需土地2畝。各處理于4月23日移栽，行距120cm，株距55cm。田間栽培管理按當?shù)刈罴汛胧┻M行。處理如下:
[0029]CK，對照，常規(guī)栽培，不用抗病毒制劑。
[0030]Tl，常規(guī)栽培，在移栽時和團棵期噴施20%鹽酸嗎啉胍可濕性粉劑。
[0031]T2移栽+團棵期使用煙草花葉爾滅。移栽時使用煙草花葉爾滅2L，稀釋50倍，于有機肥拌勻后，在移栽時穴施。于移栽后30d將煙草花葉爾滅制劑稀釋700倍葉面噴施一次。
[0032]2、試驗結(jié)果與分析:
[0033]①不同處理對煙株農(nóng)藝性狀的影響
[0034]②煙草花葉而滅防治花葉病效果
[0035]③不同處理烤煙經(jīng)濟性狀分析
[0036]初步研究表明，與對照和施用鹽酸嗎啉胍抗病毒制劑相比，施用煙草花葉爾滅對煙株的田間長勢影響不大，但能夠增大煙葉的長和寬，提高煙葉產(chǎn)量。對花葉病的防效高于鹽酸嗎啉胍。施用煙草花葉爾滅，能提高烤煙上等煙比例、均價和產(chǎn)值，煙葉產(chǎn)量、上等煙比例、均價和產(chǎn)值顯著高于對照和施用鹽酸嗎啉胍處理。
[0037]3、使用方法為:在煙草育苗時拌基質(zhì)或移栽時穴施使用，移栽后和團棵期在煙草花葉病將進入發(fā)病期時葉面噴施施用。利用本發(fā)明生產(chǎn)的菌劑對煙草花葉病毒有很好的防治效果。①煙苗在移栽后5-7d，將煙草花葉爾滅菌劑稀釋100-150倍噴施一次，煙草團棵期將菌劑稀釋100-150倍再噴施一遍;②稀釋50倍與腐熟好的有機肥等混勻在煙草育苗時拌基質(zhì)或移栽時穴施使用。
[0038]2012年至2013年在洛陽市洛寧縣豫西煙草科技園進行多次試驗，2013年在云南省文山州麻栗坡煙草實驗基地進行多點實驗，2014年又在國家煙草栽培生理生化研究基地:河南省南陽市社旗縣、河南省許昌市襄城縣進行重點試驗。對防治煙草普通花葉病效果明顯，特別在2014年嚴重干旱導(dǎo)致烤煙花葉病發(fā)生較為嚴重的情況下，施用“煙草花葉爾滅”菌劑顯著降低了煙草花葉病發(fā)病率和病情指數(shù)，提高煙株的抗旱性，促進烤煙旺長期的生長及葉片開展(能夠增大煙葉的長和寬)。顯著提高了烤煙的產(chǎn)量、上等煙比列和產(chǎn)值。經(jīng)試驗花葉爾滅對煙草花葉病的防效高于鹽酸嗎啉胍等化學試劑。
[0039]以上所述的僅是本發(fā)明的一些實施方式。對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明創(chuàng)造構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進，這些都屬于本發(fā)明的保護范圍。
【主權(quán)項】
1.一種防治煙草花葉病毒煙草花葉爾滅的制備方法，其特征在于:其菌種組分為:光合菌5%、黑曲霉2%、細黃鏈霉菌3%、淡紫擬青霉2%、枯草芽孢桿菌15%、膠質(zhì)芽孢桿菌15%、巨大芽孢桿菌15%、多粘芽孢桿菌10%、地衣芽孢桿菌10%、綠僵菌3%、蠟狀芽孢桿菌15%、側(cè)孢短芽孢桿菌5%;其制備方法為:先進行微生物試管斜面種子培養(yǎng)和微生物液體種子培養(yǎng);再將液體種子接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，通過液體發(fā)酵，獲得大量的菌體及其代謝物即液體菌劑。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種防治煙草花葉病毒煙草花葉爾滅的制備方法，其特征是:所述的制備方法為:①斜面培養(yǎng):將上述原始菌種在無菌條件下分別接種于對應(yīng)的培養(yǎng)基上活化，使用的斜面培養(yǎng)基為培養(yǎng)黑曲霉、綠僵菌、淡紫擬青霉的PDA-葡萄糖培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度設(shè)定在28°C條件下培養(yǎng)4天、培養(yǎng)枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、側(cè)孢短芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、膠質(zhì)芽孢桿菌、多粘芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、側(cè)孢短芽孢桿菌的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度設(shè)在30°C培養(yǎng)3天、培養(yǎng)細黃鏈霉菌的高氏一號培養(yǎng)基控制培養(yǎng)溫度30°C培養(yǎng)5天，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基加10g/L葡萄糖培養(yǎng)光合細菌溫度設(shè)在34°C培養(yǎng)3天； ②種子培養(yǎng):將斜面培養(yǎng)的菌種在無菌條件下分別接種于液體擴增培養(yǎng)基中，液體擴增培養(yǎng)基有培養(yǎng)黑曲霉、綠僵菌、淡紫擬青霉的TOA-葡萄糖培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度設(shè)定在28°C條件下150r/min搖床中培養(yǎng)2天，培養(yǎng)細黃鏈霉菌的高氏一號培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度設(shè)定在30°C條件下150r/min搖床中培養(yǎng)2天，培養(yǎng)枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、側(cè)孢短芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、膠質(zhì)芽孢桿菌、多粘芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、側(cè)孢短芽孢桿菌的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度設(shè)在30°C條件下150r/min搖床中培養(yǎng)I天，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基加10g/L葡萄糖培養(yǎng)光合細菌溫度設(shè)在34°C條件下150r/min搖床中培養(yǎng)I天； ③發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng):采用液體混菌發(fā)酵培養(yǎng)，按配比制備的搖床種子按5-10%接入發(fā)酵培養(yǎng)基中混菌培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)基配比為:紅糖0.6 %、葡萄糖0.3%,玉米淀粉1.8 %、豆柏粉1.5%、硫酸鎂0.03%、尿素0.12%、磷酸二氫鉀0.04%、蛋白胨0.1 %、酵母粉0.05%、碳酸鈉調(diào)節(jié)PH7.0、微量元素液5mL;培養(yǎng)條件:接種量5-10%，培養(yǎng)溫度控制30°C，轉(zhuǎn)速150-200r/min，通氣量1:0.5-0.8,發(fā)酵培養(yǎng)18-30小時，經(jīng)檢測有效活菌數(shù)120億/ml即為液體菌劑。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種防治煙草花葉病毒煙草花葉爾滅的制備方法，其特征是:所述的微生物菌體發(fā)酵制備好以后作為液體菌劑直接使用。4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種防治煙草花葉病毒煙草花葉爾滅的制備方法，其特征是:所述的生物菌劑含量和發(fā)酵液的液體菌劑含量之100億/ml。
【文檔編號】A01N63/02GK105875652SQ201510836720
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2015年11月3日
【發(fā)明人】楊建設(shè), 符云鵬, 汪立剛, 程玉海, 李彭
【申請人】鶴壁市禾盛生物科技有限公司